基质金属蛋白酶 9及其抑制因子 1与多器官功能障碍综合征发病关系研究-免疫学专业论文.docxVIP

三峡大学硕士学位论文 三 峡 大 学 硕 士 学 位 论 文 Ⅰ Ⅰ 三峡大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作 所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经 发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明 确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。 学位论文作者签名： 日 期： 三峡大学研究生知识产权承诺书 本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究 工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。 本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部 或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊 发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位， 并事先征得导师或学校相关部门的同意。 我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。 学位论文作者签名： 日 期： Ⅱ Ⅱ 内 容 摘 要 目的：通过检测多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome， MODS ） 动 物 模 型 外 周 血 及 肺 、 肝 、 肾 组 织 中 基 质 金 属 蛋 白 酶 -9 （ matrix metalloproteinase-9，MMP-9）及其抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinases-1， TIMP-1）的表达变化，研究它们与 MODS 发生的关系。同时观察严重脓毒症患者血 浆 MMP-9 和 TIMP-1 的浓度变化，研究它们对于评估脓毒症诱发 MODS 的临床应用 价值。 方法：(1)成年雄性 SD 大鼠 50 只，随机分为假手术（Sham）对照组 8 只、盲肠 结扎穿孔（cecal ligation plus puncture，CLP）模型组 42 只，CLP 组又分为 6 小时、 12 小时、24 小时和 48 小时 4 个时相亚组，最终用于实验者 Sham 组 8 只、CLP6 小 时组 8 只、CLP12 小时组 8 只、CLP24 小时组 8 只、CLP48 小时组 8 只，造模后在 不同时相处死搜集标本。(2)检测大鼠 CLP 后肺、肝、肾功能变化。 (3)光镜观察肺、 肝 、 肾 组 织 在 不 同 时 相 的 结 构 变 化 。 (4) 酶 联 免 疫 吸 附 法 （ enzyme-linked immunoadsordent assay ， ELISA ） 检 测 血 清 MMP-9 和 TIMP-1 浓 度 ， 并 计 算 MMP-9/TIMP-1 比值。(5) 逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）检测各组织中 MMP-9、TIMP-1 mRNA 的表达。(6)免疫组化检测 各组织中 IV 型胶原（collagen IV，IV-C）的表达量。(7)ELISA 法检测 43 例重症监护 病房中（intensive care unit，ICU）严重脓毒症患者血浆中 MMP-9 和 TIMP-1 浓度的 动态变化，计算 MMP-9/TIMP-1 比值，选择 18 例同期健康体检者为对照。 结果：(1)与 Sham 组相比，大鼠 CLP 后肺、肝、肾功能均有不同程度的损伤。 (2)与 Sham 组相比，大鼠 CLP 后组织均显示不同程度的水肿、充血、炎症细胞浸润。 (3)与 Sham 组相比，大鼠 CLP 后血清 MMP-9 和 TIMP-1 浓度明显升高（P0.01-0.05）， 峰值见于 24 小时（P0.01），MMP-9/TIMP-1 比值在 CLP12 小时后明显升高（P0.01）。 (4)与 Sham 组相比，大鼠 CLP 后肺、肝、肾组织中 MMP-9 和 TIMP-1 mRNA 的表达 量 6 小时即有所增加，12-48 小时均有不同程度的升高（P0.01-0.05）。(5) 与 Sham 组相比，大鼠 CLP 后 12-48 小时，肺和肝组织中 IV-C 的阳性表达有不同程度的减少 （ P0.01-0.05 ）， 24-48 小 时 肾 组 织 中 IV-C 的 阳 性 表 达 有 不 同 程 度 的 减 少 （P0.01-0.05）。(6)与对照组比较，严重脓毒症患者血浆 MMP-9 和 TIMP-1 浓度均显 著升高（P0.01），MMP-9/TIMP-1 比值显著升高（P0.01）；发生 MODS 患者血浆 MMP-9 和 TIMP-1 浓度均显著高于非