基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速鉴别耐药细菌的研究-药学专业论文.docxVIP

浙江工 浙江工业大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速鉴别 耐药细菌的研究 摘 要 目的：评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry, MALDI-TOF MS）VITEK MS 对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐万古霉素屎肠球 菌的快速鉴别能力。 方法：收集 279 株金黄色葡萄球菌临床分离株，应用 VITEK MS 质 谱仪鉴定菌种，苯唑西林和头孢西丁纸片扩散法初筛耐药菌株，聚合 酶链式反应（PCR）检测 mecA 基因。采用 VITEK MS 建立甲氧西林 耐 药 金 黄 色 葡 萄 球 菌 (MRSA) 和 甲 氧 西 林 敏 感 金 黄 色 葡 萄 球 菌 （MSSA）的数据库(SuperSpectra)，获得两组用于区分的特征峰，并 应用临床菌株对新建立的 SuperSpectra 进行验证。 同样收集 196 株屎肠球菌临床菌株，VITEK MS 进行菌种鉴定， 万古霉素和替考拉宁纸片扩散法初筛耐药菌株，PCR 检测万古霉素耐 药基因(包括 vanA、vanB 和 vanM)。采用 VITEK MS 建立万古霉素耐 药屎肠球菌（VRE）和万古霉素敏感屎肠球菌（VSE）的 SuperSpectra， 获 得 两 组 用 于 区 分 的 特 征 峰 ， 并 应 用 临 床 菌 株 对 新 建 立 的 SuperSpectra 进行验证。 结果：收集的 279 株金黄色葡萄球菌临床菌株中 275 株经 VITEK MS 确认为金黄色葡萄球菌，其中 143 株经纸片法药物敏感性和 PCR 扩 增试验证实为甲氧西林耐药且携带 mecA 基因，132 株为甲氧西林敏 1 感菌株且不携带 mecA 基因，纸片扩散法和 mecA 基因检测符合率为 100%。随机采集 66 株 MRSA 临床菌株和 1 株标准菌株 ATCC43300 的质谱指纹图谱建立 MRSA SuperSpectra，随机采集 64 株 MSSA 临 床菌株和 2 株标准菌株（ATCC25923、ATCC29213）的质谱指纹图谱 建立 MSSA SuperSpectra，比对 MRSA 和 MSSA SuperSpectra 得到两 个质荷比为 2305.6Da 和 3007.3Da 的 MRSA 特征峰，而质荷比为 6816.7Da 的峰为 MSSA 特有的响应值较高的峰，验证结果显示该方 法对 MRSA 鉴定准确率达 84.21%，对 MSSA 的鉴定准确率达 90.91%， 对于金黄色葡萄球菌是否耐药的鉴定总的准确率为 87.32%。 收集的 196 株屎肠球菌临床菌株经质谱鉴定均为屎肠球菌，其中 105 株经纸片法药物敏感性和 PCR 扩增试验证实为 VRE（66 株携带 vanA 基因，39 株携带 vanM 基因），91 株为敏感菌株，纸片扩散法和 PCR 结果符合率为 100%。随机采集 62 株临床耐药株和 58 株临床敏 感株的质谱指纹图谱分别建立 VRE SuperSpectra 和 VSE SuperSpectra，比对两个 SuperSpectra 发现，6601.4 Da 处的峰为 VRE 特征峰，而 3723.9 Da 和 3883.1 Da 处的峰为 VSE 的两个特征峰，临 床菌株验证表明该方法对 VRE 的鉴定准确率为 88.37%，VSE 准确率 为 75.76%，对于屎肠球菌是否耐药的总鉴定准确率为 82.89%。 结论：VITEK MS 可以通过采集耐药菌株和敏感菌株的质谱指纹图谱 从而建立耐药和敏感菌株 SuperSpectra，得到耐药株和敏感株的特征 峰，激活后的 SuperSpectra 即可实现对单个菌株的耐药性的快速鉴别， 该方法快速准确，将对临床耐药菌株鉴定产生革命性影响。 2 关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，金黄色葡萄球菌，屎 肠球菌，耐药，快速鉴别 3 Rapid Identification of Resistant Bacteria by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry ABSTRACT Objectives：To evaluate the performance of Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) VITEK MS mas spect