脊髓NG2细胞在大鼠神经病理性疼痛中的作用及机制研究-麻醉学专业论文.docxVIP

华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 中文摘要 脊髓NG2细胞在大鼠神经病理性疼痛中的作用及机制研究 博士研究生 王 萍 博士生导师 田玉科 教授 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室 研究背景 神经病理性疼痛(Neuropathic pain)是神经系统损伤引起的一种难以治疗的慢性状 态，国际疼痛研究协会( IASP,1994)称之为“由于外周或中枢神经系统的直接损伤或功 能紊乱引起的疼痛”。感染、创伤、代谢性疾病、肿瘤化疗、手术、射线、神经毒性 药物、神经受压缺血、炎症和肿瘤的侵袭都可引起神经病理性(中枢性和周围性) 疼痛。 急性疼痛对机体具有警示和“保护”作用，而神经病理性疼痛与之不同，它可以持续 存在，对机体无益，甚至会严重影响生活质量。神经病理性疼痛的产生机制十分复杂， 从神经损伤（伤害性刺激）到疼痛产生，会在神经系统发生一系列的变化。脊髓是疼 痛信息传递和整合的初级中枢，脊髓背角汇聚着来自外周的不同传入神经与来自脑干 和大脑皮质的下行投射神经，加上背角局部中间神经元，组成十分复杂的神经网络， 并含有非常丰富的生物活性物质，因此，脊髓在神经病理性疼痛的发生发展中起到重 要的作用。 传统观点认为神经元是中枢神经系统中重要的信号细胞，而胶质细胞仅仅是起绝 缘、营养与支持作用，因此，以往在对疼痛的研究中大量的实验关注于神经元的功能。 但近年来发现，胶质细胞在疼痛的产生与发展过程中起重要的作用。Colburn等首次提 出小胶质细胞的活化出现在疼痛的起始阶段,而星型胶质细胞在疼痛的发展和持续阶 段有很强的活化反应。外周神经损伤后初级传入神经纤维中枢端释放P物质（substance P, SP）、兴奋性氨基酸（Excitatory amino acids, EAAs）、三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate, ATP）等，作用于脊髓胶质细胞的受体，胶质细胞激活后产生和释放大量疼痛相关介质， 如细胞因子、炎性介质和神经活性物质等。过量的这些物质积聚又能敏化神经元和胶 质细胞，最终造成疼痛信号的产生和扩大，使病理性疼痛进一步发展和持续。 近年来，在中枢神经系统发现了一类兼具神经元与胶质细胞特性的细胞，这类细 胞表面特异性表达硫酸软骨素蛋白多糖NG2，被称为NG2细胞。新近的研究认为它是继 少突胶质细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞后的又一类“新型”胶质细胞系，广泛分 布于中枢神经系统的灰质与白质中。在对NG2细胞的研究中发现，在多种神经系统损伤 与疾病过程中可出现NG2细胞的活化，主要表现为胞体增大，突起增多，NG2分子表达 增多。在海马区NG2细胞与兴奋性神经元或抑制性神经元均可形成突触联系，NG2细胞 膜表面的AMPA受体和GABAA 受体参与了由神经元到NG2细胞的信息传导。在神经系 统疾病过程中NG2细胞可产生和释放多种神经兴奋性物质。此外，研究发现脂多糖刺激 小胶质细胞活化时可诱导小胶质细胞表达NG2分子及炎性介质，RNA干扰下调NG2分 子的表达后，小胶质细胞活化表达的炎性介质下调。上述研究提示NG2细胞在神经活动 （包括疼痛的发生发展）中可能占据某种重要的地位，但由于对该细胞了解较晚，相 关研究还处在初级阶段。 基于以上理论及研究基础，本研究拟通过以下三部分的研究，来观察慢性神经病 理性疼痛大鼠脊髓 NG2 细胞的变化及其参与疼痛的相关机制： １：制作大鼠慢性神经 病理性疼痛模型，观察大鼠疼痛行为学的改变（包括机械刺激 50%缩爪阈值和辐射热 刺激缩爪持续时间）及大鼠脊髓 NG2 细胞及 NG2 分子表达变化，初步探讨 NG2 细胞 在慢性神经病理性疼痛中的的作用；2：体外培养大鼠 NG2 细胞，观察其膜表面 AMPA 受体激活后 NG2 分子与疼痛相关介质表达的变化；构建大鼠 NG2 基因的 shRNA 慢病 毒载体，观察 RNA 干扰下调 NG2 分子表达后，NG2 细胞 AMPA 受体活化后疼痛相关 介质表达的改变；3：将大鼠 NG2 基因的 shRNA 慢病毒载体注射到慢性神经病理性疼 痛模型大鼠蛛网膜下腔，观察脊髓 NG2 细胞疼痛相关介质表达的变化及其对疼痛的影 响。 研究方法与结果 1.慢性神经病理性疼痛大鼠脊髓 NG2 细胞及 NG2 分子表达的变化 方法: 选择成年雌性 Sprague-Dawlye 大鼠 96 只，体重 220~250g，随机分为三组， 对照组（Na?ve 组，n=24），不做任何处理；假手术组（Sham 组，n=24），于大鼠背 部切开皮肤，分离肌肉直至 L5 横突，咬开横突，暴露 L5 脊神经后缝合肌肉与皮肤； 神经病理性疼痛模型组（Spinal nerve ligation，SN