黄芪和三七总皂苷对2型糖尿病大血管病变的防治作用及其分子机制-中西医结合基础专业毕业论文.docx

中文摘要黄芪和三七总皂苷对2型糖尿病 中文摘要 黄芪和三七总皂苷对2型糖尿病 大血管病变的防治作用及其分子机制 摘 要 随着人民生活水平的提高、生活方式的改变及人口的老龄化，糖尿病 (diabetes mellitus，DM)的发病率逐年上升，目前，已成为严重威胁人 类健康的重大疾病。2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)占整个 糖尿病比例的90％以上。冠状动脉、大脑动脉及下肢动脉等血管病变是 T2DM病人致残、致死的主要原因。已经证明，由DM所致的大血管病 变的基本病理改变与动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)基本相同，也 具有脂质代谢紊乱所导致的脂质沉积和血管细胞外基质(extracellular matrix，ECM)重塑性改变。近年人们对脂质代谢紊乱与大血管病变的关 系研究较多，对血管ECM重塑与血管病变的关系尚未引起足够的重视。 基质金属蛋白酶．9(matrix metalloproteinase 9，MMP．9)是由单核／巨噬细 胞和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)合成与分泌、 参与ECM降解的锌依赖性蛋白酶之一，在调节ECM的合成和降解平衡 及维持血管结构完整性方面发挥重要作用。然而，在T2DM大血管病变 过程中，IVl／VlP一9的表达和活性变化以及与病变进展的关系尚不清楚。 糖尿痫大血管病变的发病机制较为复杂，临床上至今尚无令人满意的 防治策略。近年研究表明，中药以其多层次、多位点、整体调节的优势， 可作用于大血管病变发生发展过程中的多个环节，较之针对某一病理环节 的西药更有希望取得疗效。糖尿痫血管病变与中医血瘀证有着共同的病理 基础，本室以往对益气活血化瘀方药治疗心血管病的作用机理进行了一系 列研究，证明该类方药通过诱导AS斑块内的VSMC凋亡而化解VSMC 过度增殖和ECM异常积聚之“瘀”：通过调节TXA2／PGl2和t-PA／PAI．1 的平衡而减轻血瘀证的病理表现。本研究以此为基础，在揭示MMP．9表 达和活化与T2DM大血管病变关系的同时，应用具有益气活血作用的黄 芪和三七总皂苷，从整体和分子水平探讨其防治糖尿病大血管病变的机 制，以寻找中药抗AS的新靶点，为中药防治糖尿病大血管病变提供实验 依据。 中文摘要1动脉壁MMP．9表达和活性与2型糖尿病大血管病变的关系 中文摘要 1动脉壁MMP．9表达和活性与2型糖尿病大血管病变的关系 基质金属蛋白酶家族(matrix metalloproteinases，MMPs)通过降解 ECM直接参与血管壁基质的重构，在糖尿病大血管病变的发生、发展中 起关键作用。本部分实验应用高脂饲料加小剂量链脲佐菌素 (Stre口tozotocin，STZ)建立2型糖尿病动物模型，从整体水平动态观察 2型糖尿病大鼠主动脉壁病理形态学、血糖、血脂及凝血纤溶系统的变化， 探讨MMP．9表达和活化与2型糖尿病大血管病变之间的关系。实验结果 如下： 1．1糖尿病大鼠主动脉形态学变化：正常大鼠主动脉各层结构完整，内皮 细胞扁平，内膜光滑、平坦。中膜VSMC排列整齐、与弹力板近似平行 相间排列。成模12周末糖尿病模型组大鼠主动脉横断面上可见较多的内 膜增厚病灶，其内主要由排列紊乱的增生的VSMC和泡沫细胞组成。病 灶表面内皮细胞肿胀，可见脂质沉积所形成的空泡，内弹力板厚薄不均， 有断裂分离现象。中膜浅层vSMC轻度增生、排列紊乱。成模12周末， 对照组和模型组主动脉横断面病灶总面积与管壁总面积比率分别为o．57 ±O．20％和1．90±0．34％，提示糖尿病大血管病变动物模型建立成功，且 病变程度较重(P0．01)。 1．2糖尿病大鼠主动脉壁MMP．9活性的变化：用含明胶的SDS—PAGE进 行酶图分析，结果显示，糖尿病大鼠主动脉MMP-9的活性是正常大鼠的 1．27倍，并且随着糖尿病病程的延长及大血管病变的发生，MMP．9活性 逐渐增强，在成模4、8和12周，其活性分别是对照大鼠的1．59、2．15 和2．72倍。 1．3糖尿病大鼠主动脉壁MMP．9表达的变化：免疫组化染色显示，从对 照大鼠主动脉壁中可检测到MMP．9蛋白的表达，在糖尿病大血管病变发 生发展过程中，大鼠主动脉壁MMP．9的表达明显增强，12周末积分光密 度值(IOD)是对照组的8．48倍。用RT-PCR对MMP．9 mRNA进行扩增 的结果显示，与对照组相比较，随着病程的延长，模型组大鼠主动脉壁中 MMP．9 mRNA的表达呈增高趋势，在成模0、4、8和12周，其表达水平 分别是对照组的1．05、1．20、1．35和1．97倍。 1．4血浆修饰型LDL含量的变化：对照组大鼠血浆Ox．LDL水平和 G