限制性核酸内切酶切割的原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用.pptVIP

人类细胞质RNA提取 完整的RNA的电泳可明显地观察到28S和18S两条带，并且28S大约是18S的两倍宽。 若两条带不明显, 则说明RNA部分降解。 * 人类细胞质RNA提取 * RT-PCR 原理及方法 逆转录PCR原理及方法 * 知识背景 基因表达 * RT-PCR原理简介 RNA cDNA 目的 片段 PCR RT 实质——聚合酶链式反应（PCR）广泛应用的变形. * 知识背景 RT (reverse transcription ） 即逆转录，指以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。逆转录过程是RNA病毒的复制形式之一，需逆转录酶的催化。 RNA cDNA 逆转录 * RT 逆转录酶的选择 RNA cDNA 逆转录酶 逆转录酶（reverse transcriptase）是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶，至少具有以下三种活性： 1.依赖RNA的DNA聚合酶活性：以RNA为模板合成cDNA第一条链； 2.Rnase水解活性：由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子； 3.依赖DNA的DNA聚合酶活性:以反转录合成的第一条DNA单链为模板，以dNTP为底物，再合成第二条DNA链。 4.常见的有哺乳动物型,最适温度37度，禽类最适温度42度 * * RT实验要素