马凡综合征植入前遗传学诊断技术初步研究-妇产科学专业毕业论文.docxVIP

解放军医学院硕士学位论文 解放军医学院硕士学位论文 PAGE PAGE 2 马凡综合征植入前遗传学诊断技术的初步研究 中文摘要 【背景】马凡综合征是一常染色体显性遗传性病，主要累及纤维结缔组织， 其病变的微纤维主要牵累三个组织器官系统：骨骼、眼和心血管,患者常因心血管 因素致死，杂合子患者有 50%的可能性将这种疾病遗传给后代，希望通过辅助生殖 技术来避免患儿的出生。1978 年英国剑桥的 Steptoe 和 Edwards 教授通力合作， 应用体外受精-胚胎移植技术孕育了世界上第一例“试管婴儿”。30 多年来，随着 生殖医学及其相关学科研究的不断深入，辅助生殖技术应用日渐广泛，植入前遗 传学诊断逐渐推广，减少了基因类疾病的遗传，实现优生优育。 【目的】初步建立马凡综合征的胚胎植入前遗传学诊断技术体系。 【方法】1.通过对一例马凡综合征患者家系进行调查，找到致病突变位点及 其在家系的遗传情况。2.对已经证实为马凡综合患者的外周血单个核细胞和行 IVF/ICSI 后夫妻双方同意捐献的异常受精和发育不良的废弃胚胎，进行外周血单 细胞，单卵裂球及 MⅡ卵母细胞应用 MDA 方法进行全基因组扩增，并对扩增产物进 行已知突变位点的特异性 PCR，产物进行测序，分析测序结果，探讨单细胞水平进 行突变位点检测的可行性。3.利用患者自身的 SNP 和 STR 位点分析，找到与突变 位点连锁的多态性遗传学标记。 【结果】 1. 本例 马 凡 综 合 征 患 者 的 突 变 位 点 为 一 新 生 突 变 c.2647TC(Trp883Arg)。2.其外周血单细胞 WGA 产物进行 PCR 后测序可以测出与患 者外周血 DNA 测序发病位点一致的碱基突变。非马凡综合征患者胚胎的单卵裂球 及 MⅡ卵母细胞未测得相应的碱基突变。3.可以采用患者自身的 SNP 位点及 D15S123，D15S978 和 D15S1028 三个 STR 位点作为遗传连锁标记。 【结论】1.通过对本例马凡综合征患者的家系调查，发现本患者的突变极有 可能为一新生突变。对于新生突变的多态性连锁标记寻找需要依靠单倍型分析。 2.本研究为探讨马凡综合征 PGD 的可行性，根据单基因遗传病 PGD 常用的遗传学 与分子生物学技术，运用 WGA 及 PCR 技术初步建立了单细胞全基因组扩增技术和 扩增产物的测序技术，构建了较为稳定的单细胞单基因疾病诊断的方法体系。3. 初步分析可以作为目的基因的多态性连锁标记：单核苷酸多态性位点和微卫星位 点，为进一步研究及临床应用打下了基础。研究还需进一步进行单个精子的扩增 分析，获得患者的单倍型信息，找到与患者突变位点连锁的多态性标记。 【关键词】 马凡综合征；植入前遗传学诊断；全基因组扩增 Primary Research of Preimplantation Genetic Diagnostic Technique for Marfan syndrome Abstract Background With the development of molecular biology, genetics and reproductive medicine, the third generation of in vitro fertilization technology is coming. The Pre-implantation genetic diagnosis is evolving rapidly and it has been applied in clinical practice widely. It is not only fulfilled the infertile couples’ dream about given birth to a child, but also give them a healthy baby. Marfan syndrome, an autosomal dominant genetic disease, is a systemic disorder of connective tissue with a high degree of clinical variability. Cardinal manifestations involve the ocular, skeletal, and cardiovascular systems. The children of an individual with Marfan syndrome are at 50% risk of inheriting the mutant allele and the disorder. Objective To