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宁夏医科大学学位论文独创性声明
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年 月 日 年 月 日
宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘
宁夏医科大学硕士研究生学位论文
中文摘要
黄芪对大鼠脑出血灶周围凋亡细胞形态与
凋亡相关蛋白及其基因作用的研究
摘 要
目的 观察黄芪对大鼠脑出血灶周围凋亡细胞形态与凋亡相关蛋白及其基因的 作用,探讨大鼠脑出血后细胞凋亡的规律及可能的凋亡通路,为黄芪应用于临床脑 出血的治疗提供理论和实验依据。
方法 清洁级健康成年雄性 SD 大鼠共 240 只,体重 300±50g。电镜、免疫组 化、RT-PCR 各用鼠 80 只,分为正常组、模型组、黄芪注射液组和黄芪甲苷组,每 组再分为 1d、2d、3d、7d 小组,每小组各 5 只。应用脑立体定位仪于大鼠尾壳核 注入肝素化 VII 型胶原酶建立脑出血模型。各药物组 SD 大鼠于脑出血模型制作后 0h 开始腹腔注射黄芪注射液(4g·kg-1·d-1)或黄芪甲苷(4mg·kg-1·d-1)进行干预,继之每 隔 24h 注射一次。正常组和模型组大鼠腹腔注射相应量的生理盐水。分别通过神经 行为学评分,电镜,免疫组织化学染色和 RT-PCR 方法观察各小组大鼠神经行为学 情况,脑出血灶周围细胞超微结构变化情况,凋亡相关蛋白表达情况、凋亡相关基 因表达情况,探讨大鼠脑出血后细胞凋亡的可能通路,为黄芪应用于临床脑出血的 治疗提供实验依据。
结果 ①大鼠神经行为学评分:黄芪注射液组和黄芪甲苷组均能明显降低脑出 血大鼠的神经功能行为学评分的级别(P0.05);黄芪注射液和黄芪甲苷 7d 组大鼠神 经行为学改善情况明显优于相应药物 1d、2d、3d 治疗组(P0.05);黄芪注射液 3d、 7d 组与黄芪甲苷相应组相比,神经行为学评分明显减低(P0.05)。②电镜:黄芪注 射液和黄芪甲苷 3d、7d 组大鼠脑出血灶周围细胞超微结构损伤程度明显轻于模型 3d、7d 组;黄芪注射液和黄芪甲苷 7d 组出血灶周围细胞超微结构的恢复程度明显
I
II
II
优于黄芪注射液和黄芪甲苷 3d 组;黄芪注射液 7d 组细胞超微结构的恢复程度要优
于黄芪甲苷 7d 组。③大鼠脑组织免疫组化染色:Bcl-2、Bax 及 Caspase-3 在正常脑 组织中仅有少量表达,且 Bcl-2/Bax 的比值接近于 1;与正常组相比,模型组、黄芪 注射液组、黄芪甲苷组 Bcl-2、Bax 及 Caspase-3 蛋白的表达均明显增加(P0.05); 与模型 2d、3d、7d 组相比,黄芪注射液和黄芪甲苷 2d、3d、7d 组 Bcl-2 蛋白的表 达明显升高(P0.05),Bax 和 Caspase-3 蛋白的表达均明显降低(P0.05);与黄芪注 射液和黄芪甲苷 3d 组相比,黄芪注射液和黄芪甲苷 7d 组 Bcl-2 蛋白的表达均明显 升高(P0.05),Bax 和 Caspase-3 蛋白的表达均明显降低(P0.05);与黄芪甲苷 3d 组相比,黄芪注射液 3d 组 Bcl-2 蛋白的表达明显升高(P0.05),Bax 和 Caspase-3 蛋白的表达明显降低(P0.05);与黄芪甲苷 7d 组相比,黄芪注射液 7d 组 Bcl-2 蛋 白的表达明显升高(P0.05),Bax 和 Caspase-3 蛋白的表达明显降低(P0.05)。④ RT-PCR:Bcl-2 mRNA、Bax mRNA 及 Caspase-3 mRNA 在正常脑组织中仅有少量 表达,且 Bcl-2 mRNA/Bax mRNA 的比值等于 1;与正常组相比,模型组、黄芪注 射液组、黄芪甲苷组 Bcl-2 mRNA、Bax mRNA 及 Caspase-3 mRNA 表达均明显升高 (P0.05);与模型 2d、3d、7d 组相比,黄芪注射液和黄芪甲苷 2d、3d、7d 组
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