毛花系列金银花ISSR分析与HPLC指纹图谱的关联性研究-中药学专业毕业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 引 言 金银花为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的 花，具有清热解毒，凉散风热的功效[1]，其原植物主要分布于山东、河南、河北， 素有“中国金银花之乡”之称的山东省平邑县，已有 300 多年的栽培历史，但由 于长期的自然选择与人工选择，其种质发生了明显的变异与分化，形成了许多农 家品种或品系，植株形态、药材产量与质量均呈现出明显差异[2]。因此从众多的 种质资源中筛选和培育出优良种质具有重要意义。 根据株形、茎枝缠绕性的强弱、枝条节间长度等形态学特征，忍冬种质大体 上可以分为三大品系。其中，毛花系列金银花具有花墩大、枝条粗壮、生长势强， 抗病虫害等优良性[3]，为山东、河南道地产区的主流栽培品种。 目前，虽已有人对不同种质金银花进行过调查、形态描述及初步的研究，但 对毛花系列金银花进行系统研究的报道较少，探讨其HPLC指纹图谱及有效成分 含量与ISSR-DNA指纹图谱相关性的研究尚未见报道。本课题在全国金银花的主 产区对毛花系列金银花种质资源进行全面搜集的基础上，采用高效液相色谱法构 建了毛花系列金银花HPLC对照指纹图谱，测定了其绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、 异绿原酸A的含量；采用ISSR分子标记技术构建了毛花系列金银花ISSR-DNA指 纹图谱；并在上述研究基础上，运用化学模式识别法探讨了毛花系列金银花HPLC 对照指纹图谱及有效成分与ISSR-DNA指纹图谱的相关性。旨为金银花的质量评 价和优良品种的选育累积资料。 第一章 文献综述 1 毛花系列金银花种质资源研究现状 1.1 毛花系列金银花种质类型 金银花原植物为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb.，在全国大部分省 市均有分布，多为栽培品种。其栽培产区主要集中于山东和河南两个省。山东产 金银花药材俗称“东银花’，河南产金银花药材俗称“密银花”。由于地理环境、 气候及栽培条件的差异造成了金银花种质资源极为丰富，形成了众多地方品种。 采用植物形态分类学的方法，可将山东金银花划分为三大品系，即毛花系列、 鸡爪花系列和野生花系列，其中毛花系列主要包括大毛花、小毛花和九丰一号 3 个农家品种[3]。河南省根据忍冬的树冠、枝条、叶、花的变异，将金银花分两大 品系：线花系和毛花系，大毛花、青毛花是大面积推广的毛花系优良品种[4]。 1.1.1 大毛花 毛花系列金银花的主流品种。植株生长茂盛，全株黄绿或浓绿色， 墩形矮大松散；枝条粗壮，自中部以上缠绕，毛密集；花枝顶端不生花蕾，叶片 长卵形或椭圆形，质厚，密被长毛茸，手感绵软。平邑大毛花花蕾细长，中上部 弯曲，密被毛，大白期上部空泡，苞片卵形至狭卵形，密被毛，河南大毛花花蕾 与平邑的略有不同，花蕾粗短，三青期先端微膨大，二白至大白期中部以上显著 膨大，苞片卵形，两产地大毛花二茬花均较少。 1.1.2 小毛花 为非主流品种。形似大毛花，花墩中型，全株深绿；枝条短，上 部略缠绕，毛密集；花蕾着生于枝条的中上部叶腋，较短，长度比大毛花小，大 白期中部以上膨大，苞片狭卵形，有二茬花；叶片卵形或卵状长方形，叶片茸毛 稀少。 1.1.3 九丰一号 该品种具有明显的多倍体植物器官巨型性特征。藤本状，单株 需搭架，全株绿色；枝条粗壮，密被粗硬长茸毛，直立性强，节短，结花枝多； 花着生于叶腋，花蕾特大，毛茸密集，苞片椭圆状披针形，有二茬花；叶质较厚， 叶片椭圆形或长椭圆形，基部略心形，密被毛。 1.2 毛花系列金银花品质研究概况 种质的优劣是影响药材产量和质量的重要因素，优良种质可以保证药材质量 的可靠性和可控性。研究发现，不同种质金银花质量参差不齐，优选优良种植品 种，对于保证其临床疗效具有重要意义。 毛花系列金银花中大毛花和小毛花均为金银花优良种质，大毛花为山东道地 产区的主流栽培品种，绿原酸和木犀草苷含量分别高达1.95%和0.158%，具有枝 条粗壮、生长旺盛的特点，有利于水土保持，特别适合山区种植；小毛花绿原酸 含量为2.10%，木犀草苷含量为0.145%，亦属于优良种质[5、6 ]。 不同种质金银花氨基酸、挥发油含量亦存在一定差异。于燕莉[7]等对大毛花 和鸡爪花两个金银花栽培品系的氨基酸进行定性定量分析，两栽培品种氨基酸含 量存在差别，大毛花氨基酸总含量为18 223.72mg/100g，羟脯氨基酸和胱氨酸比 为2：1，鸡爪花氨基酸总含量为15 540.71mg/100g，羟脯氨基酸和胱氨酸比为1.38： 0.97。张玲[8]等对山东产大毛花和鸡爪花的挥发油含量及成分进行了分析对比， 发现二者挥发油主要化学成分虽均为棕榈酸，但含量不同，大毛花为30.40%，鸡 爪花为26.36%；且大毛花中二氢香苇醇和二十四碳酸甲酯含