抗耐药绿脓杆菌化合物X412的筛选与研究-微生物与生化药学专业毕业论文.docxVIP

抗副药绿辕丰手蓖纯舍梅x412构筛选与磺究 抗副药绿辕丰手蓖纯舍梅x412构筛选与磺究 蔚言 日Ⅱ 雷 自青霉素发现以来，抗生素工业在全世界得到了迅猛发展。随着抗生 素的广泛使用，细菌的耐药性也越来越强。近几年，在许多革兰氏阴性菌 和阳性菌，甚至真核生物中发现了多重耐药的外排系统。它们由一个操纵 子(operon)调控，产生的外排系统具有耐多种不同抗生素的能力。铜绿 假单孢菌可以通过置于亚MIC量的美洛培南等抗生素中，“轻而易举”地 获得对许多结构和性质截然不同的抗生素的耐药性。G+菌中，最典型的耐 药菌株是MRSA，但它的感染仍然可以用万古霉素等抗生素得到有效的控 制；G-菌中，耐药性最典型的便是铜绿假单孢菌了，此菌不但对一般抗生 素耐药性很高，其耐药性还有以下特点：同一菌株，甚至非临床分离的敏 感菌株队Ol都有可能对结构、理化性质各不相同的抗生素耐药，如同时 对喹诺酮类、B．内酰胺类和氨基糖甙类药物耐药；此菌在一种抗生素的刺 激下极易获得对各种抗生素的耐药性。 因此，研究铜绿假单孢菌的耐药性：筛选具有抗耐药铜绿假单孢菌活 性的物质，具有十分重要的理论和实际意义。 铜绿假单孢菌的耐药机制十分复杂：它不但有外膜屏障使抗生素无法 进入细胞内，还有多种外膜微孔蛋白．一旦缺失便使得特异类型的抗生素 无法通过。当抗生素与铜绿假单孢菌接触后．可使后者产生抗生素的修饰 酶和水解酶，降低抗生素作用位点的敏感性。而且，最为重要的是：铜绿 假单孢菌中至少含有四种不同的主动外排系统．可以主动排出多种类型的 不同抗生素。这些系统的调控网络也十分复杂。 目前为止，人们已经发现四种不同的主动外排系统：MexA，B·OprM， MexC，D．OprJ，MexE，F．OprN和1999年发现的MexX，Y，它们都可以有选 择性地主动排出多种不同类型的抗生素。 在铜绿假单孢菌耐药的治疗中，最大的困扰是缺乏新的药物。克林沙 星只比环丙沙星的活性略高一H，并且其发展停滞不前。尽管目前已出现 相当多的对铜绿假单孢菌有较好抗菌活性的新品种，但除美洛培南等少数 抗耐药绿睦杼蕾纯台狗x4{2构筛选与碛究 抗耐药绿睦杼蕾纯台狗x4{2构筛选与碛究 前言 用于临床外，大多数尚处于临床前研究阶段，其I临床应用的安全性和有效 性尚待研究。而其它抗铜绿假单孢菌的抗生素也缺乏新的进展。 抗铜绿假单孢菌药物在以下方面有所进展： 提高抗菌活性 克服产B．内酰胺酶和膜通透性下降这两大耐药机制 抑制产粘液株的生物膜形成 展望未来，以下几个方面可能成为研究开发的热点： 外排泵抑制剂 能同时对抗多种耐药机制的抗菌药 ≯与B．内酰胺类和氟喹诺酮类交叉耐药率低的新多肽类抗生素 ≯抗菌药增效剂 我们选定了铜绿假单孢菌的外排泵作为筛选的靶点，建立作用于铜绿 假单孢菌外排泵的药物初筛模型，从微生物发酵液中进行药物的初步筛选 工作。 本工作是对上述模型筛选到的具有抗绿脓杆菌活性菌株的代谢产物进 行提取、分离和纯化．并对活性物质做了进一步的化学研究和活性研究。 撬耐药蟓藏抒甍诧台镜X412的筛选与研究摘 撬耐药蟓藏抒甍诧台镜X412的筛选与研究 摘 要 铜绿假单孢菌Pseudomonas aeruginosa，又名绿脓杆菌，是院内获得性 感染的常见致病菌，耐药率高、耐药机制复杂。所致感染可供选择的抗菌药 少，治疗极为困难。因此迫切需要研究开发新的抗铜绿假单孢菌的药物。近 几年研究发现，铜绿假单孢菌内的主动排出系统在铜绿假单孢菌的多重耐药 性中起着极其重要的作用。 本所重点室以铜绿假单孢菌的外排泵作为药物筛选的靶点，用过量表达 外排泵的铜绿假单孢菌Y5和外膜微孑L蛋白(OprD2)缺陷株7208以及铜绿 假单孢菌敏感菌株PA01建立了一个作用于铜绿假单孢菌外排泵的药物筛选 模型。应用此模型可以初筛作用于绿脓杆菌外排泵的药物以及与现有已知抗 生素有协同作用的活性物质。用此模型筛选出阳性菌株412。 本论文工作分两个部分： 第一部分是真菌412的发酵和抗耐药绿脓活性成分的跟踪。 第二部分是对真菌412发酵产生的活性成分进行了提取、分离、纯化， 最终得到具有抗耐药铜绿假单孢菌活性的物质X412。通过元素分析、紫外 光谱、红外光谱、质谱和核磁共振谱鉴定X412的分子式和结构式。 一抗耐药绿蘸丰手酋纯台麴x412的筛选与研 一抗耐药绿蘸丰手酋纯台麴x412的筛选与研究一。 ～一～～ 一— 一一———～英文擒赛 Abstract Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic human pathogen characterized by all intrinsic resistance tO avariety of antimierobial agents