棉花组织培养与雪花莲凝集素基因转化-植物学 植物基因工程与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

I I 摘 要 摘 要 棉花是世界性的重要经济作物 但是棉花生产由于长期受到病虫害的危害 棉花的产量和品质受到严重影响 基因工程技术的出现为棉花品质改良和病虫害 防治提供了一个有力手段 外源苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringicnsis)晶体蛋白基 因(Bt 基因)的表达对于鳞翅目害虫有明显的抑制作用 而雪花莲凝集素GNA 对同翅目害虫有较好的毒杀作用 能与 Bt 基因的抗虫谱形成互补 在抗虫转基因 棉花研究中具有良好的应用前景 转基因棉花的研制必须以成熟的组织培养技术为基础 本试验选用转 Bt 基因 棉 33B 99B 和中棉 29 为研究材料 从不同培养基 基因型 外植体 激素配比 与浓度 碳源 氮源和外源添加物等影响棉花组织培养的因素进行探讨 结果如 下 以 33B 下胚轴为外植体 接种于附加 2,4-D 0.1mg/L KT 0.1mg/L IAA 0.1 mg/L 葡萄糖 3%的 MSB 培养基上能够高频率的诱导愈伤组织 在愈伤组织继代 培养过程中 去掉 2,4-D 并将琼脂浓度降低到 6g/L 能够获得较高的胚性愈伤组织 诱导频率 以 33B 的茎尖为材料 建立起茎尖培养体系 以 3d 苗龄 下胚轴长度 为 5-7mm 的茎尖为外植体 接入不加任何激素的 MSB 培养基中培养四周 成苗率 能达到 88.9% 与棉花体细胞胚胎再生途径相比 棉花茎尖分生组织培养植株成苗的时间短 培养方法简单 也不受基因型的限制 适合作为基因转化的受体系统 因此 本 试验利用基因枪法将雪花莲凝集素GNA基因导入 33B 茎尖分生组织 恢复培 养 7d 后 在含有 Bialaphos10mg/L 的筛选培养基上进行直接筛选 最终得到抗性 植株 关键词 棉花 组织培养 转化 GNA II II Abstract Research in Cotton Tissue Culture and Transformation of Galanthus nivalis Gene Abstract Cotton is a kind of economic crop. Every year virus and pests cause serious damage to cotton production. Gene engineering has provided a useful tool for improvement in cotton quality and biological protection from pests. For some insect pests, the expression of Bacillus thuringiensis (Bt) endotoxin genes in transgenic plants has been shown to be an effective means of control, although the long-term use of trans-Bt gene may depend on devising suitable management strategies to delay the buildup of Bt-resistant insect populations. Since no reported strain of Bt is effective against homopterans, GNA lectin expressed in the transgenic plants decreased survival and overall fecundity (production of offspring) of the insects. The two anti-pest spectra can be complementaty, which underlie the research in transgenic cotton with resistance to pests. The development of transgenic cotton must base on successful tissue culture. In this research, we chose transgenic cotton strains 33B, 99B and Zhongmian 29 as materials, studied the factors that affected cotton tissue culture from media, genotypes, explant types, hormones,