黄芪总苷对糖皮质激素和β-淀粉样蛋白协同诱导神经元损伤的保护作用及其机制研究-药理学专业毕业论文.docx

安徽医科大学博士学位论文 安徽医科大学博士学位论文 PAGE PAGE 7 分泌酶和Caspase-3 mRNA水平有一定的降低作用，对α-分泌酶mRNA水平有一定 的升高作用。免疫组化结果显示，DEX和Aβ协同作用可增加大鼠脑组织海马CA1 区APP、Aβ1-40、细胞色素c和Caspase-3表达，AST和Rg1能不同程度减少APP、Aβ1-40、 细胞色素c和Caspase-3表达量。Western blot和ELISA结果显示，DEX和Aβ协同作用 可增加大鼠脑组织海马CA1区APP、Aβ1-40表达，AST和Rg1能不同程度减少APP、 Aβ1-40表达量。 第三部分 黄芪总苷对糖皮质激素和Aβ协同诱导 PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究 本实验在体外观察DEX、Aβ和DEX+Aβ对PC12细胞的损伤作用和AST的保护 作用及其机制。采用MTT法检测PC12细胞活力；采用Annexin-Ⅴ/PI双染和PI单染 通过流式细胞仪检测PC12细胞凋亡情况；采用RT-PCR检测PC12细胞β淀粉样前体 蛋白（APP）、α-分泌酶、β-分泌酶，Caspase-3 mRNA的表达水平；采用western blot 检测PC12细胞APP蛋白表达水平。 MTT结果显示，DEX（0.1、1μmol/L）在作用24h后对PC12细胞活力没有明显 的影响，而DEX（5、10μmol/L）在作用24h后能明显降低PC12细胞的细胞活力（D5, P0.05; D10, P0.01）；Aβ（1、5、10μmol/L）在作用24h后对PC12细胞的活力均 有一定的降低作用（P0.05），DEX+ Aβ各剂量组均能明显降低PC12的细胞活力 （P0.01），人参皂苷Rg1（16μmol/L）和AST（10、20mg/L）对损伤的PC12细胞 活力有一定的升高作用。流失细胞仪检测结果显示，DEX+Aβ作用24h可明显增加 PC12细胞的凋亡率，人参皂苷Rg1和AST对PC12细胞的凋亡率有不同程度的降低 作用。RT-PCR和western blot分析显示，DEX+Aβ能明显增加APP770，β-分泌酶和 Caspase-3 mRNA的水平，降低α-分泌酶mRNA水平，增加APP蛋白表达。人参皂苷 Rg1和AST（10、20mg/L）对升高的APP770，β-分泌酶和Caspase-3 mRNA水平有一 定的降低作用，对α-分泌酶mRNA水平有一定的升高作用，能降低APP蛋白的表达。 结论 应激水平的糖皮质激素能降低小鼠的学习记忆功能，对小鼠脑组织皮层和海 马神经元具有一定的损伤作用；糖皮质激素和Aβ协同作用能促进大鼠学习记忆功 能障碍，促进对大鼠海马神经元和PC12细胞的损伤作用。其机制可能与增加APP 的表达，影响与APP代谢相关酶的表达，导致Aβ的生成增多以及促进线粒体损伤、 细胞色素c释放、Caspase-9和Caspase-3表达诱导神经元凋亡有关。表明糖皮质激素 和Aβ协同作用在AD的发病和发展中可能起着重要的作用。 黄芪总苷对糖皮质激素、糖皮质激素协同Aβ诱导的学习记忆功能障碍、神经 元和PC12细胞损伤具有一定的改善作用，其作用机制可能与抑制APP表达，减少Aβ 生成，降低糖皮质激素和Aβ神经毒性作用，抑制神经元的凋亡等有关，可能在防 治AD的发生和发展中具有一定的作用。 关键词：阿尔茨海默病／黄芪总苷／地塞米松／Aβ／β淀粉样前体蛋白／凋亡／ PC12 细胞 Protective Effects of Astragalosides Against Synergistic Neuron Injury Induced by Glucocorticoids and Aβ and Its Mechanism Abstract Background： Alzheimers disease(AD) is one of the major neurodegenerative disorder of the elderly, and is characterized clinically by progressive loss of memory, cognitive deficits, behavioral disturbances and human communication disorders．With the aging of the social population, the incidence of AD is increasing rapidly leading to aserious of social problem. Thus, it is very important to study the pathoge