毛壳菌株的筛选鉴定以及抗菌物质发酵条件优化-生物学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Classified Index: Q939.9 U.D.C: 579 Dissertation for the Master’s Degree in Science ISOLATION AND CHRATERIZATION OF CHAETOMIUM AND OPTIMIZATION OF THE FERMENTATION CONDITIONS Candidate： Chen Chao Supervisor： Prof. Yang Qian Academic Degree Applied for： Master of Science Speciality： Biology Affiliation： School of Life Science and Technology Date of Defence： June, 2014 Degree-Conferring-Institution： Harbin Institute of Technology 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文 摘 要 农业生产中每年因为农作物病虫害造成很多植物死亡或者减产，给我们的 粮食生产带来十分巨大的损失。生物防治植物病虫害中具有持续时间长、防治 效果显著、安全性好并且不使生物产生抗药性。因此，生物防治被认为是未来 农业病虫害防治中主要的防治方法。毛壳菌是一种主要的生物防治菌，它具有 作为很好的生物防治菌剂的能力。不仅可以通过竞争作用，重寄生作用，诱导 植物产生抗性还可以产生抗菌物质抑制植物病原菌。 本课题主要研究从特定环境土壤中筛选具有生物防治功能的毛壳菌，并初 步研究其代谢物发酵条件。本实验，采用分离培养基从样品中筛选具有纤维素 降解能力的微生物，通过在显微镜下观察微生物形态结构，筛选发现其中有 8 株是毛壳菌菌株分别为 G12、G14、G15、H6、H10、I3、I4、I5。分子水平鉴定 主要是通过 ITS 序列分析，鉴定微生物种属关系，发现八株菌株与球毛壳菌相 似度高达 94%以上。通过与病原菌对峙实验作为复筛，发现菌株 H10 对核盘菌、 立枯丝核菌、尖孢镰刀菌均有较好的生物防治能力。而且其生长速度也相对较 快，在 28 °C 条件下，4 d 就能长满 9 cm 的平板，在 3 d 时候就开始有暗色的子 囊壳产生。 通过产酶培养基诱导，每天测毛壳菌 H10 菌株纤维素类酶活，发现 28 oC、 170 rpm 条件下，培养 2 d 酶活达到最大，其中滤纸酶活、外切葡聚糖酶活、内 切葡聚糖酶活、β-葡萄糖苷酶活分别为 0.55 U、0.35 U、0.47 U、0.47 U。接着 通过在 28 °C、170 rpm 条件下，PDB 液体发酵培养。经过研究发现，液体培养 过程中菌体几乎不产生生殖结构，没有子囊壳、以及子囊孢子等结构的存在。 推测可能是由于氧气量以及附着物的原因，造成菌丝无法产生生殖结构。进一 步研究在不同的 pH、温度条件下对代谢物抑菌能力的影响。将发酵液在 0.1 MPa， 40 °C 下进行浓缩。研究发现，在初始 pH 为 6.5 时，抑菌率达到最大至 47.32%。 在发酵时间为 13 d，代谢物的抑菌能力最大至 43.11%。研究还发现菌体量的大 小对代谢物的产量也有影响。 尽管本课题主要是基础研究，但是它扩大了生物防治的菌种资源，并且证 实了球毛壳菌菌株 H10 具有成为优良生物防治菌种的潜力，为以后工业化生产 生物防治菌剂奠定基础。 关键词：生物防治；毛壳菌；代谢物；抑菌能力 I - Abstract Agricultural production decrease greatly because of crop diseases and pests. Biological control of plant diseases and pests has many advantages, such as long time effect, the control effect remarkable, good safety and not causing resistance. Therefore, biological control is considered to be the main control method in the future agriculture production. Chaetomium is one of the most important biological control strains, which has the ability to serve as a good strain in biological control