麻疯树毛状根培养体系建立及诱导子对其有效成分含量的影响-植物学专业毕业论文.docxVIP

致谢 致谢 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 本研究得到国家自然科学研究基金项目，江苏省优秀创新团队 项目（药用微生物前期研发），江苏省优势学科—化学生物学的资助，在此表示 感谢！ 本论文是在蒋继宏教授的悉心指导下完成的。首先我要深深感谢我的导师蒋 继宏老师，本论文从选题立题、实验内容设计以及论文写作等方面都是在蒋老师 的悉心指导下完成的。蒋老师学识渊博、治学态度严谨求实、思维活跃、待人和 蔼可亲、人生态度积极向上，这些时刻激励着我。导师献身科学的精神、对科学 敏锐的洞察力及对学生孜孜不倦的教诲与激励，都使我受益终身。借此机会，谨 向在我读研的这三年里关心我生活、指导学业、传授我做人道理的导师致以最崇 高、真诚的敬意和最衷心的祝福！ 感谢王俊老师在植物组织培养实验、实验设计及图片数据处理方面的悉心指 导，同时也感谢王俊老师生活上的关心。感谢曹小迎老师在实验设计及实验过程 中对我帮助。感谢鞠秀云老师在我实验涉及化学方面的指导，鞠老师勤奋认真的 工作态度是我受益颇深。感谢秦盛老师在植物内生菌实验方面提供无私的帮助， 秦老师对科研的热爱使我发现了科学研究的乐趣所在。感谢袁博老师在 HPLC 和 GC-MS 实验中涉及化学部分的悉心指导。 另外，在整个实验过程中，实验室孙勇老师、刘金娟老师、曹成亮老师、陈 凤美老师、胡秀彩老师的关怀和指导，在此表示最诚挚的感谢！ 研究生三年是在江苏省药用植物生物技术重点实验室生物工程中心这个充满 学术氛围的课题组中度过的，实验室先进的仪器设备和轻松而又紧张地学术氛围 使受益良多。在此，衷心感谢已经毕业的缪倩、李长根、郑璐、王祺琦、卓盼、 杜德尧、卞光凯、黄天姿、陈永强等师兄师姐；感谢张越己、郑竹君、左飞等同 学在实验中给予的无私帮助和生活上的关怀；非常感谢许培源、杨成流、王佩佩、 谭力、张文迪、朱潇、张文娟等师弟师妹在具体实验中给予的无私帮助与配合。 感谢上海师范大学开国银老师赠予的发根农杆菌菌株，感谢四川省林业科学 研究院王乐辉教授提供的优质的麻疯树种子，你们的无私帮助对实验的进展有重 大的帮助。 感谢生命科学学院的郑元林老师、潘沈元老师、李宗芸老师、孙存华老师、 郑兴峰老师、陈才法老师、袁卫华老师、屈艾老师、王爱民老师、郑桂红老师等 毫无保留的传授知识，使我在学业上有了很大的进步和提高。 衷心的感谢我的父母和弟弟，他们无尽关爱和坚定地支持是我全身心投入课 题研究的保障。 感谢三年来关心和支持我的亲人和朋友们！ 徐艳 2013 年 6 月 江苏师范大学 摘要 摘要 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 麻疯树（Jatropha curcas L.）种子含油量高，是理想的生物柴油树种，同时麻 疯树也是一种具有药用价值的植物，其代谢产物具有抗肿瘤、抗病毒等功能，麻 疯树在工业、医药等多方面具有广泛的用途。本文以组织培养 7d 的麻疯树幼苗为 主要的实验材料，通过发根农杆菌侵染外植体的方法建立了麻疯树毛状根的诱导 体系，并且优化了各种影响毛状根诱导率的条件，选择可提高麻疯树毛状根诱导 率的最佳条件。研究 4 种诱导子对麻疯树毛状根的生长及根中麻疯树酚酮 B 含量 的影响，以期筛选到可以显著提高麻疯树毛状根生物量及麻疯树毛状根生物量的 诱导条件。另外，从分子水平研究了诱导子与麻疯树酚酮 B 合成的关系，分析了 该化合物与其合成途径中关键酶基因 FPS 表达量之间的关系。本文主要的研究结 果如下： 1.麻疯树毛状根发根诱导体系的建立：本章以麻疯树胚培养 7d 后长出的幼苗 为基本实验材料，选取幼苗子叶和下胚轴作为诱导麻疯树外植体的材料，采用农 杆菌侵染外植体的方法建立麻疯树毛状根诱导体系，分别从麻疯树外植体类型选 择、外植体预培养时间、发根农杆菌菌液 OD600 值、菌液侵染外植体时间、培养基 中添加 AS 的浓度以及共培养时间等多个条件进行了优化，通过实验结果得出了麻 疯树毛状根诱导最佳条件：选择以麻疯树幼苗下胚轴作为发根农杆菌侵染的外植 体，预培养 2d、侵染菌液的 OD600 为 0.5、侵染时间保持在 8min，选择发根农杆菌 菌株为 R1000 进行侵染、共培养时间维持在 2-3d 实验可达到最大的诱导率，另外， 在培养基中加入 50μmol/L 的乙酰丁香酮可明显提高毛状根的诱导率。 2.麻疯树毛状根液体培养基选择：麻疯树毛状根在不同的培养基中生长速度不 尽相同，实验比较了麻疯树毛状根在六种基本培养基中生物量的增加情况，发现 麻疯树毛状根在 1/2MS 培养基中生长较好，鲜重比对照增加了 1.59 倍，以 1/2MS 培养基作为麻疯树毛状根的液体培养基。 3.本文选用了 3 种生物诱导子（酵母提取物、KLBMP1111 与 KLBMP4804 菌 体悬浮液）和非生物