绵羊传染性胸膜肺炎与基因组DNA甲基化的关系-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据 我所知，除文中已经注明引用的内容外 ，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的 研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表 示谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文 并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书 馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。 有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 研究生签名： 时间： 年 月 日 导师签名： 时间： 年 月 日 I 摘要 绵羊支原体性肺炎是一种慢性呼吸道疾病，是由绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）所引起的。该病主要症状是咳嗽、喘气、渐进性消瘦以及肺间质 增生性炎症等。绵羊支原体肺炎的控制和消灭是比较困难的，因为绵羊感染支原体肺炎 后呈亚急性表现，加之康复绵羊还可成为长期携带病菌者，所以该病给许多国家的养羊 业造成重大损失。新疆是我国饲养羊只数量较多省区，上世纪九十年代前鲜见有该病的 报道，近年来由于新疆地区引种和集约化养羊的发展需要，新疆地区爆发了较大规模绵 羊支原体肺炎，使新疆畜牧业的生产与发展受到严重的影响。 目前研究 DNA 甲基化与病原感染性疾病的报道很少，为了从自身的角度来提高绵 羊对传染性胸膜肺炎的抗感染能力，本文章优化了适合检测绵羊这一物种的全基因组 甲基化的方法：MSAP(Methylation Sensitive Amplification Polymorphism)技术，以绵羊（以 湖羊为主）为实验材料，对 MSAP 技术中的关键因素进行优化筛选，经过不同因素水平 摸索，在该优化体系下选用 4 对引物通过 8%的鲨鱼齿测序胶聚丙烯凝胶电泳对绵羊 DNA 进行甲基化模式分析，获得了清晰、重复性好的银染图谱。表明该体系可用于绵 羊 DNA 甲基化的相关性分析实验。 通过对 MSAP（甲基化敏感性多态性）方法进行实验优化后，对 20 头患病绵羊 和 20 头正常绵羊基因组 DNA 的甲基化与传染性胸膜肺炎关联性初步分析实验。以绵 羊在传染性胸膜肺炎患病前后的全基因组 DNA 为研究对象，经过同裂酶 HpaII 和 MspI 对其进行双酶切，最后通过测序胶聚丙烯凝胶电泳处理，从 16 对 MSAP 选择性 引物组合中挑选出预实验中结果比较清晰 4 对引物组合来进行绵羊患病前后甲基化 变化的评估。MSAP 技术通过改良后比较适合全基因组 DNA 的甲基化检测，测序胶 聚丙烯凝胶电泳能够得出清晰的实验图谱，符合实验的要求。通过统计学分析得出患 病绵羊甲基化水平普遍高于非患病绵羊的甲基化水平，同时甲基化多态性也随之升 高。 结果表明传染性胸膜肺炎的感染与否，与绵羊的甲基化程度有一定的关联。这对 研究疾病与动物自身表观遗传之间关联性起到一定的参考意义。推测绵羊传染性肺炎 的发生和发展与其基因组 DNA 甲基化具有关联性，可以从甲基化的角度来探讨宿主在 预防和治疗疾病等方面的相关问题。 关键词：绵羊；传染性胸膜肺炎；DNA 甲基化；MSAP；测序胶。 II Abstract Sheep Mycoplasma pneumonia is a chronic respiratory disease, is by the sheep Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma ovipneumoniae, MO). Main symptom is the disease cough, gasping, progressive emaciation and pulmonary interstitial hyperplastic inflammation, etc. Mycoplasma pneumonia of sheep it is quite difficult to control and eliminate, because after sheep infected with mycoplasma pneumonia in subacute performance, combined with rehabilitation sheep can also become contaminated with for a long time, so the disease is a serious loss to the sheep industry