麻疯树遗传多样性的ISSR和SRAP分析-森林培育专业毕业论文.docxVIP

II II 2.5 PCR 扩增产物的检测 24 ISSR-PCR 扩增产物的检测 24 SRAP-PCR 扩增产物的检测 25 2.5.3 结果记录 27 2.6 数据统计分析27 3 结果与分析27 3.1 基因组总 DNA 的提取 27 3.2 PCR 反应体系的优化 28 3.2.1 正交试验直观分析28 3.2.2 正交试验的方差分析29 3.2.3 单因素试验结果分析30 3.2.4 SRAP 反应体系稳定性检测结果 31 3.3 麻疯树遗传多样性分析 32 3.3.1 麻疯树遗传多样性的 ISSR 分析 32 3.3.2 麻疯树遗传多样的 SRAP 性分析 36 ISSR 和 SRAP 标记的相关性分析 41 ISSR 和 SRAP 复合聚类分析分析 41 3.3.5 麻疯树遗传多样性与生态地理因子的相关性分析 42 4 讨论与结论43 4.1 讨论 43 4.1.1 麻疯树基因组 DNA 的提取及反应体系的优化 43 4.1.2 引物对 ISSR 和 SRAP 分子标记的影响 44 4.1.3 麻疯树群体的遗传多样性44 4.1.4 麻疯树群体的遗传结构45 4.1.5 ISSR、SRAP 标记在研究麻疯树遗传多样性中的的比较 47 4.2 结论 47 PAGE PAGE 1 摘 要 麻疯树（Jatropha curcas L.）隶属于大戟科（Euphorbiaceae）麻疯树属 （JatrophaL.），多灌木，是一种具有多种用途的植物。因其种子含油量高、 可以提炼生物柴油、能替代石化燃料这一重要经济特性，人们对这种应用潜 能巨大的油料作物越来越关注。本研究以 13 个居群的麻疯树植物为实验材料， 在完成供试材料 DNA 提取的基础上，对 ISSR、SRAP-PCR 反应进行优化， 用筛选出的多态较性好的 13 条 ISSR 引物和 12 对 SRAP 引物对麻疯树材料进 行 ISSR 和 SRAP 分子标记评价其遗传多样性，按 Nei 的方法计算其相似系数， 并对 13 个居群的麻疯树材料进行聚类分析。结果如下： 1.用改良 CTAB 法提取的 DNA 质量和纯度都较高，符合实验要求。 2.用正交优化设计确定了对 PCR 反应体系影响较大的三个的因子（引物浓 度、dNTPs 浓度和 Mg2+浓度），并对这三个因子进行单因素试验，最终确定 ISSR-PCR 反应体系：模板 DNA 40ng，Taq 酶 0.5U，引物 0.4μmol/L，dNTPs 150μmol/L，Mg2+ 2.5mmol/L,1XBuffer。SRAP-PCR 反应体系：DNA 60ng Taq 酶 0.5U，引物 0.4μmol/L，dNTPs 150μmol/L，Mg2+ 2.5mmol/L,1XBuffer。 3.ISSR 标记结果：13 条 ISSR 引物共扩增出 158 个标记，其中多态性标 记 149 个，多态带百分率为 94.30%，麻疯树无论在物种水平（PPB=94.30%， Ht=0.3834,I=0.5531）还是在群体水平（PPB=61.59%,h=0.2759,I=0.3931）都 表 现 出 较 高 的 遗 传 多 样 性 。 群 体 间 分 化 巨 大 （ Gst=0.2803 ） ， 分 子 方 差 （AMOVA）分析表明，本研究中麻疯树居群间和居群内的差异均达到极显 著水平（P0.001）,在总的遗传变异中有 31.52%来自居群间，68.48%的变异 发生在居群内，遗传变异主要存在于居群内个体间。居群间有一定的基因流 （Nm=1.2836）。基于 Nei 遗传相似系数聚类，结果将 13 个居群分为三大类。 双柏和隆林居群各自聚为一类，其他 11 个居群聚成第三类。 4.SRAP 标记结果：12 对引物组合共检测到 361 个标记，多态性标记为 351 个，多态带百分比为 97.23%。物种水平上，平均观测等位基因数 1.9723， 平均有效等位基因数 1.7925，Nei’s 基因多样性指数 0.4365，Shannon 信息指 数 0.6267。居群水平上，上述各项参数的值分别为 1.7746、1.6133、0.3366、 0.4831。Gst 为 0.2320，居群间的变异占总变异的 23.20%，居群内变异是麻疯 树遗传多样性的主要来源。基因流 Nm 为 1.6555，说明麻疯树居群间存在着一 定的基因交流，防止了由于遗传漂变导致的居群之