酪氨酸酶活性与黑素生成关系的基础及临床研究.docVIP

酪氨酸酶活性与黑素生成关系的基础及临 床研究 黑素细胞是产生黑素的高度特异性细胞，细胞内的高尔基 体可合成黑素小体，为黑素合成的场所。树突是黑素细胞形 态学的重要特征性标志，在黑素转运中起着至关重要的作 用。它形成树枝状分叉，朝邻近的角质形成细胞生长，促使 黑素细胞将黑素输送给它们，增加机体色素沉着［1］。黑素 是一种化学本质为蛋白衍生物的无定形小颗粒，广泛存在于 人的皮肤、毛发和眼球组织中，决定着相应部位的颜色。并 吸收阳光中的紫外线，保护皮肤不受阳光照射的伤害，因此, 又称作光防护色素。可分为真黑素（eumelanin）和褐黑素 （pheomelanin）两类，前者在黑色毛发中大量存在，后者 在褐色及红色毛发中比率相对较高。黑素生成异常与黄褐 斑、白化病等色素障碍性疾病关系密切，伴随着人们对自身 形象越来越高的追求，对黑素的相关研究日益成为医学美容 界关注的热点问题。本文就酪氨酸酶的活性与黑素生成关系 的基础及研究综述如下。 1酪氨酸酶基因家族、酪氨酸酶及黑素的生成 1. 1酪氨酸酶基因家族与酪氨酸酶：酪氨酸酶基因家族 成员包括酪氨酸酶基因（TYR基因）、酪氨酸酶相关蛋白1基 因（TYRP1基因）和酪氨酸酶相关蛋白2基因（TYRP2基因） 等。它们的序列具有高度一致性，共同作用于黑素细胞，调 节黑素生成的种类和数量。 核心成员TYR基因在人类定位于Ilql4-q21,长度超过 65kb,包括5个外显子和4个内含子，是眼皮肤白化病I型 (0CA1)的致病基因。其第一外显子最长，几乎占了全部编 码序列的一半。基因上游存在着TATA、CAAT盒等调控序列。 在llpll至着丝粒区域，存在着一个TYR基因的相关序列， 是第四和第五外显子的同源序列，同源性高达97%[2] o其编 码的酪氨酸酶是由529个氨基酸残基组成的黑素小体跨膜酶 蛋白，分子量为55KD,糖基化后分子量为65?75KD。包括 CuA和CuB这两个铜原子结合位点、由18个氨基酸残基组成 的信号肽及C末端疏水的跨膜区[3] o TYRP1基因在人类定位于9p23,是眼皮肤白化病III型 (0CA3)的致病基因。该病患者的黑素并不会完全缺失，但 在数量和类型上发生了改变。其编码的酪氨酸酶相关蛋白-1 (TYRP1)是由537个氨基酸残基组成的I型跨膜糖蛋白， 作用与酪氨酸酶相似但活性较弱[4]。酪氨酸酶相关蛋白-2 (TYRP2)与TYRP1在一级结构上非常相似，折叠后亦形成 相似的三级结构。 1.2黑素的生成：黑素的生成是一个复杂的生化过程， 酪氨酸酶在其中发挥酪氨酸務化酶、多巴氧化酶和5, 6二 餐基呵噪氧化酶的作用。首先，酪氨酸在酪氨酸酶的催化下 生成多巴(DOPA),该反应即为黑素合成过程中限速步骤。 依旧在酪氨酸酶的催化下，多巴氧化为多巴醍(DQ),后者 经过多聚化反应生成无色多巴色素。无色多巴色素极不稳 定，可被另一分子多巴醍迅速氧化成多巴色素。而后多巴色 素在TYRP2的作用下可以释化为5, 6二轻基唱噪竣酸 (DHICA),也可以脱竣为5, 6二務基口引噪(DHI)o 5, 6二 释基呵噪经由酪氨酸酶催化氧化为5, 6」引噪醍，为真黑素 形成的前体。由5, 6二軽基口引噪转化来的真黑素为黑色的, 由5, 6二務基11引噪竣酸转化而来的真黑素为棕色，TYRP1活 性增强有利于黑色真黑素的生成。真黑素与褐黑素的生成比 率则主要与酪氨酸酶活性水平相关，酶活性增高促使真黑 素生成增加［3］。 1.3酪氨酸酶对于黑素合成的影响：酪氨酸酶靠跨膜肽 段固定于黑素小体膜上，影响其在黑素小体膜上的定位及黑 素小体腔内pH改变等，均可致黑素合成障碍。酪氨酸酶氨 基末端的信号序列对于其正确定位至关重要，突变可能导致 的信号肽消失引起酪氨酸酶的错误折叠并迅速降解。同时， 铜原子和酶蛋白的结合对于酶发挥催化功能也具有非常重 要的作用，一个铜原子与酶的结合有助于酶与另一个铜原子 的结合。据对眼皮肤白化病的致病突变研究显示，致病的无 义突变和移码突变相对随机地分布于酪氨酸酶基因的编码 区，而错义突变的分布则明显呈现出5个簇集区。除CuA、 CuB结合区外，其他3个分别位于CuA与氨基末端之间、CuA 与CuB之间、CuB与TM区域之间［5］。据此推测致病的错义 突变或者影响了酶与Cu原子的结合，或干扰酶与底物的结 合，从而影响酪氨酸酶活性。有些突变还可能引起酶蛋白生 成过程的分选异常，致使蛋白多肽提前降解，黑素小体内的 酪氨酸酶活性大幅度降低甚至消失［3］。在非黑素细胞，通 过增加胞内细胞器的pH值，酪氨酸酶从内质网到达高尔基 体进行糖化加工，然后由运转囊泡携带至II期黑素体［6］。 将正常的和突变的TYR基因在C0S-7细胞中表达，发现突变 后的基因产物并不能象野生型那样通过内质