邻苯二甲酸二辛酯与重金属联合暴露对小鼠和斑马鱼胚胎的毒性及作用机制研究-应用化学专业毕业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指 独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指 导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己注明引用 的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或 撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机 构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡 献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意 识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：发吻加 日期：枷lS年b月／D日 万方数据 江苏大学硕士学位论文摘要 江苏大学硕士学位论文 摘要 邻苯二甲酸二辛酯(DOP)作为增塑剂而广泛应用于塑料、树酯和橡胶类制品 的生产，是一种重要的环境激素类化合物，它可通过不同的途径进入人体，从而 危害人类健康。铅(Pb)和砷(As)均为广泛分布于自然界中的重金属污染物， 可通过多种途径(呼吸道、皮肤黏膜、消化道等)进入人体，可致人体多种系统 毒性(神经系统、消化系统、泌尿系统、血液及造血系统等)。DOP、Pb和As 同时存在于环境中，目前关于DOP、Pb和As的单独毒性的研究较多，而关于 DOP以及三者联合作用的报道甚少。因此，本文以小鼠为研究对象，研究DOP、 Pb和As的联合暴露毒性作用及机制；以斑马鱼胚胎为研究对象，研究DOP和 As联合暴露毒性作用及机制，为联合暴露的研究提供一定的基础，该研究对人 类健康具有重要的现实意义。主要内容如下： 第一部分DOP、Pb和As联合暴露对小鼠学习记忆能力的影响及其作用机 制研究 DOP(200、500和1000 mg／kg体重)、Pb(50 mg／L)和As(10 mg／L)对3周龄 雄性小鼠持续暴露8周，其中DOP采用灌胃暴露，Pb和As饮用水暴露，采用 行为学、组织病理学、酶学和蛋白印迹等方法，研究DOP、Pb和As联合暴露 对小鼠学习记忆功能的影响及作用机制。 (1)对小鼠学习记忆功能的影响。结果表明，与对照组相比，DOP、Pb+DOP、 As+DOP和Pb+As+DOP的高剂量组，小鼠的逃逸潜伏期显著增加，平均穿越平 台的次数明显减少，说明小鼠学习记忆能力显著下降：析因分析表明，三者联合 暴露时存在拮抗作用。组织病理学结果表明，DOP、Pb和As联合暴露会导致小 鼠海马神经细胞病变。 (2)ICP分析小鼠组织中Pb和As含量。结果表明，与对照组相比，Pb、 As暴露组小鼠组织中Pb和As含量均显著增加，尤其是在脑中，说明Pb和As 均能在小鼠组织中蓄积；Pb+As组与Pb组相比，Pb和As在脑组织中的含量均 显著降低；析因分析表明Pb和As联合暴露对小鼠脑组织中Pb和As的含量存 在拮抗作用。 (3)作用机制研究。酶学研究结果表明，与对照组相比，DOP、Pb+DOP、 万方数据 邻苯二甲酸二辛酯与重金属联合暴露对小鼠和斑马鱼胚胎的毒性及作用机制研究As+DOP和Pb+As+DOP高剂量组小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)币EI乙酰胆 邻苯二甲酸二辛酯与重金属联合暴露对小鼠和斑马鱼胚胎的毒性及作用机制研究 As+DOP和Pb+As+DOP高剂量组小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)币EI乙酰胆 碱酯酶(AChE)活性显著降低，而丙二醛(MDA)含量和一氧化氮合酶(NOS)活 性显著增加，说明DOP单独及其与Pb和As联合暴露可致小鼠产生氧化应激： 析因分析表明，三者联合暴露对小鼠脑组织中的NOS和AChE活性存在拮抗作 用。蛋白印迹结果表明，与对照组相比，DOP、Pb+DOP、As+DOP和Pb+As+DOP 的高剂量组，小鼠海马组织中Bax和Caspase．3表达量上调，Bcl．2表达量下调。 说明DOP、Pb和As联合暴露可能的作用机制是：通过对机体引起氧化损伤， 进而导致细胞凋亡，引起神经毒性效应。 第二部分I)OP和As联合暴露对斑马鱼胚胎的毒性研究 DOP(0．005、0．05和O．5 mg／L)平P As(0．01 mg／L)对斑马鱼胚胎单独及联合暴 露，持续5 d。采用RT-PCR法分析As和DOP单独及联合暴露对斑马鱼胚胎神 经、发育及氧化应激相关基因的表达的影响。 (1)与空白对照组相比，联合暴露会显著影响NMDA结构亚基NRIA及 调节亚基NR2A、NR2B和NR2D的表达水平；行为相关基因bcl一2及c-fos表达 显著降低，说明As和DOP联合暴露可对斑马鱼的神经系统造成一定的损伤。析 因分析表明，二者联合暴露对NMDA受体亚基NRlA表达存在拮抗作用，对 NR2A的表达存在协同作用。 (2)联合暴露可显著E调能引起氧化应激的相关蛋白Cu／Zn．SOD、 Mn．SOD、GPxl和CAT的mRNA表达，说明二者联合暴露可致斑马鱼胚胎产 生氧化应激，破