沙眼衣原体感染体液免疫应答谱的建立及Tarp蛋白生物学特性的研究-免疫学专业毕业论文.docxVIP

{IlYltllllllllllll9111]llllllltl811111151111113111111唑原创性声明 {IlYltllllllllllll9111]llllllltl811111151111113111111唑 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包 含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共 同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名： 墨器 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允 许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据 库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。 作者签名：刮 导师签名 日期：!丛年-羔月丝日 本课题受如下基金资助：1．R01A1064537 本课题受如下基金资助： 1．R01A1064537 Chlamydia trachomatis proteomics，US NIH， US$3．38M． 2．T32A1007271 Mechanisms of Microbial Pathogenesis, US NIH，US$0．45M． 3．U 1 9A1045429 Searching for novel chlamydial vaccine candidates，US NIH，US$1．0M． 4．Merck-UT agreement Identifying Novel Chlamydia Antigens， Merck Co．US$1．08M． 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 沙眼衣原体感染体液免疫应答谱的建立及Tarp蛋白 生物学特性的研究 摘 要 沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，简称CD是一类专性细胞内寄生 的原核微生物，为临床上导致失明的主要病因之一，亦是性传播性疾 病(sex transmitted disease，STD)最常见的病原体，Ct感染生殖道后亦 可增加卸Ⅳ传播的危险性及宫颈鳞状细胞癌的发病率。虽然沙眼衣原体 感染可以用抗生素治疗，但由于感染后症状常不明显，甚至没有自觉症 状，因而很容易被忽视，其诊断和治疗往往被延误，造成。在宿主体 内持续存在引起盆腔炎和不孕等多种并发症。接种疫苗将是预防和控 制衣原体感染性疾病最为有效的方式。由于灭活疫苗不能给沙眼患者 提供保护性作用，近十年来，大家主要致力于研究衣原体亚单位疫 苗，但由于对衣原体保护性和致病性因子知识的缺乏，至今仍未有成 熟的衣原体疫苗问世。从全基因组范围分析衣原体性蛋白所诱导的免 疫应答，寻找。免疫优势抗原，将有助于筛选衣原体毒力相关因子和 保护性蛋白，阐明。的致病机制，促进衣原体诊断试剂盒及疫苗的研 制。 一、沙眼衣原体感染人体后体液免疫应答谱的建立 研究目的 1．克隆表达D型。全基因组ORFs编码蛋白的GST融合蛋白，为D 蛋白质组学的研究奠定基础。 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 2．建立。感染人体后体液免疫应答谱，筛选衣原体免疫优势抗原；比 较活沙眼衣原体感染及死衣原体接种后抗血清的抗原识别谱，筛选 衣原体感染依赖性抗原，为进一步阐明。感染的致病机制，o血 清诊断试剂盒的开发及疫苗的研制提供实验依据。 研究方法 1．依据文献和互联网http：／／stdgen．northwestem．edu／对D型。全基因组 ORFs进行分析，给预测的918个衣原体基因或基因片段分别设计 特异性引物，采用PCR方法从D型。基因组中扩增获取目的基 因。构建pGEX-6p-CTs原核表达重组质粒，转化大肠杆菌XL． 1blue，IPTG诱导表达重组GST．CTs融合蛋白，建立D型Q蛋白 质组。 2．将衣原体蛋白质组的全部融合蛋白按照ORFs顺序分装到10块96孔 微量凹孔板中，建立衣原体全基因组蛋白质阵列。收集。生殖道 感染女性患者血清，应用ELISA法检测这些抗血清与衣原体全基因 组蛋白质阵列的免疫反应性，建立沙眼衣原体感染人体后的体液免 疫应答谱，并筛选出衣原体的免疫优势抗原。 3．为鉴定衣原体性蛋