辽宁碱蓬SlPEAMT基因启动子分离及盐诱导功能分析-细胞生物学专业毕业论文.docxVIP

辽宁师范大学硕士学位论文摘 辽宁师范大学硕士学位论文 摘 要 磷酸乙醇胺氮甲基转移酶(PEAMT)是合成胆碱的关键酶，胆碱是合成甜菜碱的 底物，甜菜碱是一种小分子渗透调节剂，在植物抵抗渗透胁迫中起一定的作用。已经克 隆了多种植物的PEAMT基因，该基因的表达受盐诱导。本文对辽宁碱蓬SlPEAMT启动 子进行研究。主要内容与结果如下： 通过TAIL．PCR方法获得了辽宁碱蓬SlPEAMT基因上游序列(1450 bp)，TSSP．TCM 软件预测位于起始密码子上游．340 bp处的T是转录起始位点，由此获得了SIPEAMT 基因上游897 bp的启动子序列。PLACE和PlantCARE序列分析表明，S／PEAMT启动 子序列含有基本的转录元件：TATA．box和非生物胁迫相关元件：MYBCORE，MBS，LTR， W-box，MYC识别位点，GT一1元件，WRKY710S和LTRECOREATCORl5等。 为了进一步研究获得的启动子的功能，我们对辽宁碱蓬SlPEAMT基因启动子进行 了5’端缺失分析，通过PCR扩增获得了3个5’端缺失片段，分别为pPl(一897,-一-343bp)、 pP2(一817一-343bp)、pP3(一364,-,+343bp)。将缺失片段分别插入到pCAMBIAl301载体中 来替代CaMV 35S启动子，获得了缺失表达载体，分别命名为pCAMBIAl301．pPl， pCAMBIAl301一pP2和pCAMBIAl301-pP3。 通过农杆菌介导的叶盘转化法获得了各缺失载体转基因烟草。经过PCR检测、GUS 组织化学染色检测，获得转基因阳性植株。 通过GUS组织化学染色和荧光定量分析研究转基因烟草中各启动子缺失片段的盐 诱导功能特性。非胁迫条件下，转基因烟草叶片的GUS酶活性低。盐胁迫处理后，转 基因烟草叶片GUS酶活性有显著的提高。在250 mmol L-1 NaCl情况下， pPl(．897～+343bp)启动子片段的转基因烟草的GUS酶活性比未经胁迫处理的增加18．6 倍。 本研究表明，SlPEAMT基因启动子pPl(一897 to+343 bp)区段含有基本的启动子顺 式作用元件和盐诱导元件，该启动子片段可以驱动其下游基因表达，且在NaCl胁迫下 高效表达。 关键词：磷酸乙醇胺氮甲基转移酶(PEAMT)；TAIL．PCR；辽宁碱蓬； GUS活性；盐诱导 辽宁碱蓬S1PEA，lIT基因启动子分离及盐诱导功能分析Isolation 辽宁碱蓬S1PEA，lIT基因启动子分离及盐诱导功能分析 Isolation and salt—inducible characterization of the S／PEAMT promoter from Suaeda liaotungensis K． Abstract phosphoethanolamine N-methyltransferase(PEAMT)is the key enzyme in the synthesis of choline．Choline iS the substrate in the synthesis of glycine betaine(GB)．Glycine betaine iS a non-toxi osmopretectant and plays an important role in osmotic stress．PEAMT gene has been cloned from many plants and the expression of PEAMT iS induced by salt．This study iS about SlPEAMT promoter from Suaeda liaotungensis K．．Specific work and results are as follows： In this study，the 5’flanking region of研雎么M丁was isolated bv TAIL—PCR from Suaeda liaotungensis and a 1450 bp sequence was obtained．The transcription start site was identified as T and 10calized at．340 bp upstream of the start ATG codon with the TS SP．TCM program．Functional elements were analyzed by the PLACE and P1antCARE programs．Aside from the basal trans