利用大肠杆菌合成糖蛋白并对糖链长短的调节进行初步探索-生物工程专业毕业论文.docxVIP

分类号：Q81 分类号：Q81 单位代码：10422 密级：公开 学 号：201211720 p▲ 菇办孚 ⑧ ’ 硕士学位论文 (专业学位) 论文题目：利用大肠杆菌合成糖蛋白并 对糖链长短的调节进行初步探索 Biosynthesis of glycoprotein by E．coli and exploration of regulating polysaccharides chain length 作者姓名 韩东雷 学院 名 称 生命科学学院 专业名称 生物工程 合作 导 师 201 5年5月21日 万方数据 原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。 对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方 式标明。本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：兰鸳嘲日期：j三k雌；I 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同 意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子 版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：舞鸯通导师签名：j錾J幽期：．翌!篁。＆L 万方数据 山东大学硕士学位论文目录 山东大学硕士学位论文 目录 中文摘要 ．．： ．I ABSTRACT ．．III 符号说明 ． VI 第一章 绪论 ．．1 1．1糖类概述 2 l，1．1糖的定义及分类 ．2 1．1．2细菌多糖 ．2 1．1．3大肠杆菌脂多糖 ．3 1．2大肠杆菌0抗原 4 1．2．1大肠杆菌D抗原的结构 4 1．2．2大肠杆菌合成D抗原的基因簇 5 1．2．3大肠杆菌0抗原的合成过程 6 1．2．4 Wzz简介 ． 7 1-3 N一连接糖基化系统 9 1．3．1真核生物Ⅳ-连接糖基化 9 1．3．2原核生物中Ⅳ-连接糖基化 ．．10 1．3．3细菌的寡糖基转移酶PglB ．．11 1．4同源重组技术 ．．． 12 1．4．1同源重组技术简介 12 1．4．2基因敲除的一般步骤 ． 12 1．4．3同源重组在克隆技术上的应用 13 1．5糖类疫苗的研究 15 1．5．1多糖疫苗 15 1．5．2糖蛋白结合疫苗 16 1．6糖蛋白的合成 17 1．6．1糖蛋臼的化学合成法 17 1．6．2糖蛋白的生物合成法 17 万方数据 山东大学硕士学位论文第二章 山东大学硕士学位论文 第二章 糖蛋白的生物合成 21 2，l引言 一21 2．2实验材料 22 2．2．1菌株和载体 ．22 2．2．2酶和耗材 ．22 2．2．3培养基与缓冲液 ．23 2．2．4仪器设备 一24 2．3实验方法 24 2．3．1 利用Red闷源重组进行基凶敲除 24 2．3．2载体构建 ．26 2．3．3表达菌株的构建及糖蛋白的纯化 ．27 2．4实验结果与讨论 ． ．30 2．4．1 基因敲除菌株E coti W3 l 10Awaal的构建 ．．30 2．4．2载体蛋白及糖基转移酶基因的克隆 ．30 2．4．3载体pYESIL—0157帕的构建 ．32 2．4．4表达菌株的构建及糖蛋臼的纯化 ．32 2．4．5糖蛋白的Western blot验证 34 2．4．6糖蛋白的质谱分析 ．35 2．5本章小结 36 第三章 糖蛋白糖链长短调节的初步探索 37 3．1引言 ．_37 3．2实验材料 38 3．2．I 菌株和载体 ．38 3．2．2酶和耗材 ．38 3．2．3仪器设备 ．38 3．2．4培养基与缓冲液 ．39 3．3实验方法 。．39 3．3．1 利用Red同源蘑组进行基因敲除 39 3．3．2载体构建 ． 40 万方数据 山东大学硕士学位论文 山东大学硕士学位论文 3．3．3利用RedE／T技术直接克隆大片段 ．．41 3．3．4利用同源重组技术对载体进行修饰 ．43 3．3．5 LPS的提取及银染 ．44 3．4实验结果与讨论 ．．45 3．4．1 基因敲除菌株E coli W3 1 10AwaalAwzz的构建 ．45 3．4．2不同来源WZZ基因的克隆 ．46 3．4．3 E coliOl57：H70抗原基因簇的构建(不含WZZ基因) ．．46 3．4．4 p15A一157 antigen载体的表达验证 48 3．4．5 p15A．157 antigen载体的修饰 49 3．5本章小结 一50 全文总结 ．51 参考文献 ．53