莲原花青素对皮肤的保护作用及其分子机制研究-农产品加工及贮藏工作专业毕业论文.docxVIP

一 一 一 些堡垦垄童茎翌些些塑堡篓堡旦丝茎坌量!!型!|!!壅 摘要 本文是在本课题组发现莲中富含原花青素，并已证实莲房原花青素(LSPC) 能有效清除自由基、抗脂质过氧化、调节血脂、保护心脏等研究基础上，旨在 利用现代医学、分子生物学技术和药理实验方法及参考保健食品功能测定方法， 从细胞膜中Ve含量和膜脂流动性、酶活性、免疫调节等角度，探讨莲房活性因 子一原花青素对正常皮肤的保护作用，在此基础上，从整体动物水平、细胞水 平和基因水平，进一步深入系统地研究LSPC对肿瘤和辐射致损伤皮肤的保护和 修复作用。并着重从抗氧化、病理形态、细胞凋亡、基因调控等方面探明LSPC 对皮肤黑色素瘤B16的抑制作用及其分予机制。为LSPC作为预防和治疗黑色素 瘤的药物或辅助药物及保护皮肤的保健食品和化妆品的开发利用提供理论基础 和科学依据。同时也为系统深入了解原花青素对皮肤保护作用机制提供可借鉴 的思路和方法。 主要研究结果如下： 1．莲房原花青素对大鼠红细胞膜维生素E含量及膜脂流动性的影响 LSPC是有效的羟基自由基清除剂和很强的天然抗氧化剂。对Fenton体系 产生的羟基自由基有很强的清除作用；体系酸碱度、金属离子(Cu”、Ca2+、 A13+、M92+)对LSPC清除羟基自由基有很大影响。当有20mmol／L AI”存在时， 使得LSPC的清除率从63．1％升高到81．6％。说明LSPC鳌合cu”、Ca”、A1j十、 M92+金属离子后，能使其清除羟基自由基的作用增效。 LSPC可有效防止红细胞膜中不饱和脂肪酸的过氧化，抑制膜中脂质过氧化 产物MDA生成，保持细胞膜的完整性和功能：在保护红细胞膜中天然抗氧化剂 vE的同时，并使其再生。当LSPC浓度为5．099／mL时，红细胞受氧化损伤的膜 得以恢复，其膜的荧光偏振度(p值)接近正常红细胞膜P值水平，从而降低了红 细胞膜因氧化造成的各向异性增加。 2．莲房原花青素对皮肤的抗氧化作用研究 LSPC能加快皮肤和血清中抗氧化酶的生物合成和提高酶的活力，从而提高 机体的抗氧化能力。给大鼠连续口服灌胃100mg／kg．bw LSPC 35d，血清和皮肤 中91)A含量明显低于对照组(P0．05)；而SOD和GSIt—Px酶活力显著高于对照 组；皮肤和血清中Hyp含量tg,B著高于对照组(P0．05)，使皮肤中胶原蛋白和 水分含量分别提高2．7％和3．8个百分点。提示，LSPC是通过提高皮肤抗氧化酶 系统活力和降低hlDA生成，增强胶原蛋白的生物合成及提高皮肤组织的保水性 能来延缓皮肤衰老。 V 段玉清 段玉清 华中农业大学2004届博士学位论立 3．莲房原花青素对小鼠免疫功能的影响 连续灌胃30～90mg／kg．bw LSPC对小鼠体内腹腔巨噬细胞吞噬功能有较强 的增强作用，能使单核-巨噬细胞的吞噬能力明显提高；提高DNFB诱导的小鼠 耳肿胀率和小鼠半数溶血值(HC50)，且存在明显的剂量依赖关系；体外MTT 法测得LSPC能刺激T、B淋巴细胞增殖，并存在剂量．效应关系。半体内法测 得LSPC能显著激活NK细胞活性。表明，LSPC对免疫功能有较强的调节作用。 4莲房原花青素对酪氨酸酶及黑色素生物合成抑制作用初步研究 LSPC对黑色素的生物合成有显著的抑制作用。7．8×10-49／L 5．Og／L LSPC 对酪氨酸酶活力有抑制作用，其中，7．8×10-49／L～0．19／L时，随LSPC浓度增 大抑制率下降；0．19／L-14．09／L时，随着LSPC浓度增大抑制率逐渐增高，最大 抑制率高达99．9％，且该抑制作用属于可逆的竞争性抑制。对多巴色素自动转化 黑色素有显著的抑制作用，其半抑制浓度IC50 1．7509／L，最大抑制率为69．8％。 5，莲房原花青素对皮肤黑色素瘤B1 6的抑制作用及其分子机制 LSPC具有抗黑色素瘤的作用。连续灌胃120mg／kg．bw LSPCI4d抑瘤率达到 55 3％。用含25～100u g／mL的LSPC培养小鼠黑色素瘤B16细胞72h，可显著 抑制其生长增殖，对B16有细胞毒，半数抑制浓度(IC50)为32．4 u g／mL，最 大抑制率高达84．5％。 LSPC抑制黑色素瘤细胞分裂增殖，机制有两点： 第一，LSPC可促进B16细胞凋亡。显微形态观察表明，LSPC n‘b引起B16细 胞形态发生改变，使细胞缩小、核固缩，胞质凝缩，线粒体膨胀聚集，染色质 逐渐凝集边移，附在核膜周边；荧光强度明显增加。细胞凋亡分析，G0／G1期前 出现亚二倍峰；细胞周期分析，肿瘤细胞生长阻滞于S期。通过激光扫描共聚焦 显微镜的静态和动态观察，经100“g／mLLSPC处理B16细胞后，可使细胞内Ca” 堆积和重新分布，细胞核内Ca2+荧光强度从133．1+24．8增加到1 8