山羊促卵泡素和促黄体素基因部分序列的研究-动物遗传育种与繁殖专业论文.docx

山羊促卯泡素和促黄体素基因部分序列的研究(摘要)李利(四川农业大学动物遗传育种与繁殖学专业) 山羊促卯泡素和促黄体素基因部分序列的研究(摘要) 李利(四川农业大学动物遗传育种与繁殖学专业) 指导教师：吴登俊教授 通过提高猪、牛、羊等家畜的产仔(羔)数以降低生产成本和增加经济效益是国 内外的畜牧经营者和研究者的目标。在探索产仔(羔)数的影响因素方面已经发展到 主基因水平。FSH和LH是促进卵泡的生长、发育、成熟和排卵必不可少的激素，同 时它们还影响动物的生殖系统发育和雄性动物精子的生成。在猪的产仔数研究中已经 将FsHB基因的一个插入片段作为一个分子标记，但在山羊中只有FSHl3基因nfluNA 序列的报道。本研究参照GenBank中公布的牛、绵羊和猪等物种的FSHl3基因和LHB 基因序列，设计PCR引物，首次扩增并测定了21个家养山羊品种(中国地方品种15 个，培育品种2个，引进品种4个)的VSHl3基因的两个内含子(内含子l和内含子2) 和外显子3的部分序列以及LHB基因的部分序列，研究它们的遗传结构，品种间、 品种内的变异特征，并进一步利用序列分析物种间系统发育。 山羊FSHl3基因第一内含子DNA序列长度641bp，其平均的碱基组成为35 9％ (A)，13 9％(C)，17 3％(G)，32 9％(T)；G+C(31．2％)的含量远低于A+T (68 8％)的含量。山羊群体的FSHl3基因intronl只有两个变异位点，分别位于7l (A或G)和289(A或G)位。因此，从单倍型分析，共存在两种。安哥拉山羊(An)、 辽宁绒山羊(L)、简阳本地羊(N)、乐至黑山羊(Lz)和奴比羊(Nb)这五个品种 共享一种单倍型，其余15个品种共享另一种单倍型。 山羊FSHl3基因内含子2的全长1560bp，A、T、C、G四种碱基分别占总数的35 7％、 32 8％、16．8％和14．8％，A+T的含量(68，5％)高于G+C含量(31．5％)。在所有测 定个体中，共检测到14个碱基缺失和27个突变位点，单一信息位点7个，多态信息 位点20个，其中19个两碱基变异位点，一个位点(890位小G_T)发生三碱基变异。 进一步分析发现转换中以A-G为主(8次／13次)，而颠换则以T—G(6次／13次)和 进一步分析发现转换中以A-G为主(8次／13次)，而颠换则以T—G(6次／13次)和 A—T(4次／13次)为主要形式。有些品种，如西藏山羊(Zh)、辽宁绒山羊(L)和波 尔山羊(Bo)，各自拥有独特的单倍型，萨能山羊(Sa)和简阳大耳羊(Jy)中没有 与其它品种共享的单倍型，其余品种之间存在部分单倍型共享。 试验测定-JFSH 13基因第三外显子的部分序列，共计574bp，其中前222bp(包括 TAA)为编码序列，其余为非编码序列。3’非编码区在品种间和品种内没有变异发 生，在编码区共检测到6个突变位点，单一信息位点2个(59、142)，简约信息位点4个 (89、165、176、187)，没有碱基的插入或缺失突变发生。有5个碱基突变引起氨基酸 的变化：a5c’g／Y76C，a1429／K104E，989t／R86L，t165c／R1lSQ和a187c／P119T。其中 R86L既存在于Ⅱ一B亚基结合区域，也处于受体结合区域。密码子第三位GC占的比例 达到68．7％，以c或G结尾同义密码子的使用频率更大。 本研究首次将山羊的LH]3基因部分序列测定出来。测得的各山羊品种LHIB基 因的长度均为929bp，其中1-136bp为5’非翻译区(136bp)，163—459bp为intronl (297bp)，628—862bp为intron2(235bp)，第一外显子长26bp’(后15bp为编码区)： 第二外显子长168bp，其余67bp为第三外显子部分区域。LHl3基因的GC的含量65 3％ 显著高于A+T(34 6％)，尤其是密码子的第三位GC占89％，表明LHB基因是GC 富集区。在LH[B基因序列共检测到9个多态位点，2个单一信息位点，7个简约信息 位点，只有1个三碱基变异(第401位)。有3个位点突变在5’非翻译区，三个碱 基的改变在内含子l中，第二外显子和第三外显子中分别有2个和1个碱基突变。编 码73个氨基酸，同义密码子的使用具有强烈的偏倚性。 在LHl3基因136bp的5’非翻译区中，共存在14个调控元件结合位点，3个sD—l 元件，Egr-1和GSE(SF—1)各2个，TATA框、GC盒、AP．1、Runx factors、CAC盒、 LYF一1和Ptx-I元件各1个。它们与转录的启动或调控有关，但没有发现NF．Y元件 (CAAT框)，可能原因是本试验测定的5’UTR太短。品种间序列变异中有两个位 于5’Eg