课件：慢性疼痛基因治疗的研究现状和展望.pptVIP

疼痛基因治疗的展望 随着生物治疗技术的发展以及慢性疼痛机制研究的深入，基因治疗有望成为继药物治疗，局部神经阻滞，手术治疗，中医药治疗后的第五种治疗手段，为难治性顽固性疼痛的患者带来福音。 展 望 Good Future Far-Reaching THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * TrkA酪氨酸激酶受体蛋白 机械能感受（DEG/ENaC）通道。[Fig 2b]由于在异种表达系统中发现了一种阳离子通道可以被细胞外的氢离子激活开放通道，这个通道蛋白就被命名为ASICs。在小鼠中ASICs分为5个亚群，ASIC1a、ASIC1b、ASIC2a、ASIC2B和ASIC3。 * Bradykinin缓激肽 CGRP = 降钙素基因-相关肽 * 广义的基因治疗是指利用基因药物的治疗，而通常说的狭义的基因治疗是指用完整的基因进行基因替代治疗，一般用DNA序列，主要的治疗途径是体外（ex?vivo）基因治疗，即在体外用基因转染病人靶细胞，然后将经转染的靶细胞输入病人体内，最终给予病人的疗效物质是基因修饰的细胞，而不是基因药物。除间接体内法外，还可以用基因药物进行直接体内途径治疗，这些基因药物可以是完整基因，也可以是基因片段（包括DNA或RNA）；可以是替代治疗，也可以是抑制性治疗（包括DNA转录水平和mRNA翻译水平）。基因药物不但可用于治疗疾病，而且可用于预防疾病。这类基因药物治法简单易行，发展迅速，新型基因药物不断产生。从1990年转移ADA基因到现在的大部分基因治疗临床试验都是体外基因治疗，先从病人体内获得某种细胞（例如T淋巴细胞），进行培养，在体外完成基因转移后，筛选成功转移的细胞扩增培养，然后重新输入患者体内。这种方法虽然操作复杂，但效果较为可靠，称其为。同时，科学家们又千方百计设计出更加简便的基因治疗方法。例如，1994年美国科学家利用经过修饰的腺病毒为载体，成功地将治疗遗传性囊性纤维化病的正常基因cfdr?转入患者肺组织中。这种直接往人体组织细胞中转移基因的治病方法叫做体内（in?vivo）基因治疗。 * 基因导入系统（gene delivery system）可分为病毒载体系统和非病毒载体系统。 病毒载体系统： 包括慢病毒载体、单纯疱疹病毒载体、腺相关病毒载体、腺病毒载体和反转录病毒载体，均需在细胞内包装。 非病毒载体系统：裸DNA、 DNA-阳离子脂质复合物、 DNA-蛋白质复合物、 DNA-阳离子多聚物和DNA/RNA嵌合物等载体，但与病毒载体相比较，其转染效率及基因表达水平均较低，故尚需进行改进。 * 优点：1、利用病毒天然的感染性进入细胞，转导效率高； 2、复杂的装配过程由细胞完成； 3、不同的病毒载体具有不同的表达特点。 存在的问题： 1、安全性 涉及细胞毒性、染色体毒性、免疫毒性等 2、靶向性 转导靶向性、转录靶向性 3、有效性 转导效率、靶向性、基因表达水平和持续时间、表达的可调控性 * 腺病毒毒粒是二十面体的无包膜双链DNA病毒，直径为70－90nm。毒粒具有252个壳粒，二十面体有12个顶角壳粒，为一邻体（penton)；加外还有240个非顶角壳粒，为六邻体(hexon)。每个顶角壳粒上有一条纤维突起。病毒毒粒含有14种蛋白。 * 哺乳动物腺病毒的双链线状DNA基因组长约36kb。其转录及表达相当复杂。 * 腺病毒作为转移载体具有以下优点， 1是安全。2) 宿主范围广 3) 感染性强 4)能使人类蛋白获得高水平表达。 另外还有稳定性比较好、病毒粒子滴度高和易于制备与纯化等特点 特别的对于疼痛的基因治疗来说，可以通过腰椎穿刺、背根神经节注射、静脉注射等方式将治疗基因带入与疼痛密切相关中枢或外周神经系统。 * 腺病毒载体在应用过程中也发现它的缺点， 1) 载体容量有限（只有约8kb) 2)宿主强烈的免疫反应和细胞毒性 3) 基因表达时间短暂。 这些缺点主要是由病毒残余基因及其表达产物所引起的宿主强烈的免疫反应造成的。 表现在肝脏,局部注射则会引起周围组织坏死、炎症和浮肿等症状。 体液免疫反应投药1～2 周后就会产生高效中和抗体。一般认为这种中和抗体由病毒蛋 白引起,当再次通过静脉重复投与时,病毒载体很快被中和,根本无法到达靶细胞 细胞免疫引起炎症和表达细胞被清除效应。表达激剧减少,到第4 周通常检测不出目的蛋白。 为减轻免疫反应,延长有效表达时间,研究者们从以下几个方面取得了一定的进展。直至第三代几乎全部腺病毒基因 组缺损型(gutless)