课件：病理讨论三.ppt

THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * 结核分枝杆菌细长略弯，有时呈分枝状，大小约1～4?m×0.4?m，无芽胞、鞭毛和荚膜（图18-1）。在陈旧培养物中或药物治疗后可变为L型，呈丝状、球状、串珠状等多形性。在结核性脓疡和痰标本中有时可见非抗酸性革兰阳性颗粒，称莫赫（Much）颗粒，亦为L型。此颗粒在体内或经培养后可转变为典型的结核分枝杆菌。 图18-1 结核分枝杆菌抗酸染色 ×1000由于结核分枝杆菌细胞壁中含有大量的脂质，不易着色，一般不用革兰染色法染色。用齐—尼氏抗酸染色法（Ziehl-Neelsen acid-fast stain），以5%石炭酸复红加温染色后能抵抗3%盐酸酒精的脱色作用，结核分枝杆菌被染成红色，而其他非抗酸菌及背景则被美篮复染呈蓝色。此外，结核分枝杆菌在药物如异烟肼的影响下，亦可变为抗酸染色阴性。 * 分离培养常用罗氏（Lowenstein）固体培养基,，菌落为乳白色或米黄色，不透明，表面粗糙呈颗粒、结节或菜花状。 -液体培养时，因结核分枝杆菌胞壁中含大量类脂，疏水性较强，细菌易聚在一起，加之专性需氧，故呈菌膜生长。若加入吐温－80（Tween-80），可降低细菌表面的疏水性，使细菌分散均匀生长，有利于结核分枝杆菌的初次分离培养和药物敏感试验等。 结核菌素试验 结核菌素是一种由结核菌培养滤液制成、只含结核菌蛋白、不含结核菌体的生物制品。 是用结核菌素来测定机体能否引起迟发型超敏反应的一种试验，以判断机体对结核分枝杆菌有无免疫力。 结核菌素试剂 旧结核菌素（old tuberculin，OT) 纯蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD) PPD有两种，即结核分枝杆菌制成的PPD-C和卡介苗制成的BCG-PPD 方法 取两种PPD 5单位注入两前臂皮内 48～72小时后观察红肿直径 结果 阴性：＜5mm 阳性：＞5mm 强阳性：≥15mm 若PPD-C侧皮肤红肿大于BCG-PPD侧为感染。反之为接种卡介苗 结核菌素试验 结核菌素试验结果分析 阳性 强阳性 阴性 硬结、红肿直径 5-15mm之间 感染结核分枝杆菌 不表示正患结核病 硬结直径超过15mm以上 表明可能有活动性结核，应进一步检查 注射部位有针眼大的红点或稍有红肿，硬结直径小于5mm 无结核感染，但应考虑： 原发感染的早期 正患严重结核病 正患其他传染病（麻疹） 选择卡介苗接种对象、测定卡介苗接种后的免疫效果 了解人群自然感染率 作为婴幼儿结核病的辅助诊断 测定肿瘤患者的细胞免疫功能 结核菌素试验应用 微生物学检查 痰结核菌检查 是确诊肺结核、发现传染源、观察疗效、决定是否治愈和流行病学调查统计的主要依据和指标。其特异度可高达99%，远较胸片准确。现一般用涂片法抗酸染色，也有用涂片萤光染色检查的，速度快，适于大量检查时。要确定阳性与否至少初诊查痰次数为2次，最好3次。无痰时可用高渗盐水雾化吸入引痰，可提高痰菌检出率；培养法查痰菌，经纤支镜取灌洗液查菌也都能进一步提高检出率。儿童大多不会咳嗽留痰而常吞咽入胃，故可抽清晨胃液或呕吐物查菌。? 结核菌素试验 我国使用的结素先后有旧结素（ＯＴ）与纯结素（ＰＰＤ）。ＯＴ为结核菌液体培养基中提取的含结核菌体蛋白及代谢产物的物质。ＰＰＤ则为由结核菌菌体制取的纯蛋白衍生物，无非特异性反应。使用时用5ｕ于前臂屈侧0.1ml皮内注射，48--72小时看反应，硬结纵横平均直径≥5mm为阳性。 ?结素试验对婴幼儿诊断价值高于成人，因其自然感染率尚低。一旦阳性应视为新近感染。３岁以下5ｕ强阳性反应应视为有活动性结核并给予治疗。? THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 浓缩集菌 先集菌后检查，可提高检出率。 分离培养 将集菌后的材料，经中和后接种于固体培养基，加橡皮塞于37摄氏度培养。一般需2-4周长成肉眼可见菌落。液体培养时将集菌材料滴加于含血清的培养液，可于一周内在管底看到有颗粒生长。取沉淀物做涂片，可快速获得结果。比涂片的检出率高约100倍。并可进一步作生化反应等鉴定和药敏试验。 动物实验 将集菌后的材料注入豚鼠，3-4周后若局部淋巴中大，结核菌素实验阳性，即可进行病例解剖。观察肺、肝、淋巴结等脏器有无结核病变，并作形态、培养等检查。 PCR法查痰 ?是近代分子生物学方法，可检测痰标本中少许结检菌的特异性DNA。40条结核菌即可阳性，有的仅几条结核菌即可阳性。方法灵敏，较培养法阳性率高；特异性亦高；检测快速；需两天即报结果甚至几个小时即出结果；还可作菌型鉴定；对异菸肼和利福平等已可用PCR方法作耐药检测，并已有人利用PCR法检测DNA指纹追踪传染源。PCR法查痰菌不足之处是还有