课件：L天冬酰胺酶在医药中的应用.pptVIP

L-天冬酰胺酶的作用机制 L-ASP抗肿瘤的作用机制在于它能降低人体内L-天冬酰胺和L-谷氨酰胺的浓度，这两种氨基酸是合成嘌呤环和嘧啶环的重要组成部分。肿瘤细胞缺乏天冬氨酰合成酶，不能合成L-天冬酰胺，需要摄取外源L-天冬酰胺才能存活。当外源L-天冬酰胺被分解掉时，癌细胞合成核苷酸和戴白骓·蛋白质的能力就会显著降低，因此L-ASP能有效的抑制肿瘤细胞的增值。 L-天门冬酰胺是某些肿瘤细胞生长必不可少的氨基酸，对人体正常细胞而言 自身具有合成L-天门冬酰胺的能力，而肿瘤细胞缺乏天门冬酰胺合成酶不能合成天门冬酰胺，其细胞需要从外源的L-天门冬酰胺摄取才能存活。L-ASP 能催化水解L-天门冬酰胺生成L-天门冬氨酸和氨，因此能够有效地抑制癌细胞的生长，最终使癌细胞消亡。 L-天冬酰胺酶的分离纯化 将L-ASP与高效先导序列pelB融合使得L-ASP在细胞外表达，并在L-ASP的N末端添加了6个组氨酸序列标签，然后采用Ni-NTA亲和层析法分离纯化得到L-ASP，成本高，并不适合大规模的工业化生产。 经蔗糖破壁、(NH4)2SO4分级沉淀、透析、DEAEDE52、Q Sepharose Fast Flow等步骤纯化得到的L-ASP比活力高达U/mg，SDS检测时显示为一条带，RT-HPLC分析纯达到99%，最终回收率为50.5%，适合大规模的工业化生产的要求。 4、L-天冬酰胺酶的纯化与修饰 4、L-天冬酰胺酶的纯化与修饰 L-天冬酰胺酶的修饰 L-ASP的聚乙二醇化不但降级了胰蛋白酶对它的降解作用，而且修饰酶的抗原性与天然酶相比也大为下降。 此外，聚乙二醇化L-ASP与传统的脂质体化L-ASP相比与有明显的优势。 微囊化修饰 将L-天冬酰胺酶用半透膜性质的聚合物制成微囊型固定化酶。其大小一般为1～ 500Lm。 低分子底物可以自由出入胶囊膜, 与酶接触而起反应, 反应产物则因浓度不断增加而不断渗透出胶囊外面。 囊型固定化可以克服天然酶针剂出现的抗体抗原反应 该注射到人体后, 对膜具有良好通透性的低分子底物, 能长时间发挥作用, 比天然酶的 疗效好, 而且急性毒副反应也较低。 4、L-天冬酰胺酶的纯化与修饰 用固定化酶反应器进行体外循环净化血液中L -天冬酰胺 方法： 将固定化L -天冬酰胺酶装填于柱中或将其固定在酶板、酶管或血液透析膜上, 使血液从固定酶上通过, 除去癌细胞生长所需的L 2天冬酰胺, 从而达到治疗的目的。 改进的功能： 由于酶不与体内器官直接接触, 也就不会发生毒性和过敏反应。 具有天然酶的高度专一性及温和条件下高效催化的特点, 还具有一定的机械强度; 酶经固定化后, 稳定性有较大的提高, 可以反复使用也可储存较长时间。 4、L-天冬酰胺酶的纯化与修饰 1 Erwinase获准用于治疗对大肠杆菌源性天冬酰胺酶过敏的急性淋巴细胞性白血病患者 注：Erwinase：欧文氏菌源性的天冬酰胺酶 5、 L-天冬酰胺酶在医药上的进展 2011年11月18日，EUSA制药和美国食品药品管理局(FDA)宣布孤儿药Erwinase获准用于治疗对大肠杆菌源性的天冬酰胺酶有超敏反应的急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者。 Erwinaze是一种可降低循环血液中天门冬酰胺水平的天冬酰胺酶。天门冬酰胺是细胞生长的必需氨基酸，将其从血液中清除可抑制ALL相关细胞的生长。天冬酰胺酶产品来源于细菌，近15%~20%的患者可对大肠杆菌源性的现代制剂产生超敏反应因而无法持续治疗。Erwinaze是由欧文氏菌产生的，在免疫学性质上有别于原有的制剂，适用于对大肠杆菌源性治疗有超敏反应的患者。 FDA批准Erwinase是基于相关的多项临床试验结果，共涉及630例ALL患者。在一项纳入58名受试者的关键性疗效研究中，100%的可评估患者达到了天冬酰胺酶活性主要终点。 Erwinaze的不良反应：过敏反应、胰腺炎、转氨酶和胆红素水平升高、血栓形成、出血、高血糖症、恶心和呕吐。 2 静脉注射天冬酰胺酶对于55岁左右新诊断急性成淋巴细胞白血病诱导缓解期治疗的药效动力学以及安全性 与儿童相比，天冬酰胺酶成人治疗的药代动力学、药效学以及安全性信息非常有限。研究人员采用单次静脉注射天门冬酰胺酶(2000 IU/m(2))作为25例成人患者诱导缓解的线药物，并在几个时间点获得血清样本。结果可见，天门冬酰胺酶活性血清峰浓度的总体均值为1 IU/ml，消除半衰期为7天，分布容积为2.43 L/m(2