基因工程概论(华东理工大学张惠展.ppt

基因工程的基本概念 A 重组DNA技术的理论基础 B 基因的分子生物学 C 基因工程的基本原理 D 基因工程的支撑技术 D 基因工程的支撑技术 基 因 工 程 5 2 3 4 1 6 7 基因工程的基本原理 基因工程的基本条件 基因工程的操作过程 目的基因的分离克隆 大肠杆菌的基因工程 真核酵母的基因工程 2 基因工程的基本原理 19世纪中 孟德尔 豌豆杂交试验 遗传因子 经典遗传学 20世纪初 摩尔根 果蝇杂交实验 基因 基因学 1944年 艾弗瑞 肺炎双球菌转化实验 遗传物质DNA 1973年 伯格-杰克森-考恩-鲍耶 DNA分子体外拼接 分子遗传学 1953年 沃森-克瑞克 DNA双螺旋结构 分子生物学 基因工程 2 基因工程的基本原理 2 基因工程的基本原理 提高外源基因的剂量——分子遗传学原理 筛选修饰重组基因表达的转录调控元件，如：启动子、 增强子、操作子、终止子、上游调控序列等 列、mRNA非编码区、密码子等 ——分子生物学原理 修饰构建蛋白质生物合成的翻译调控元件，如：SD序 基因工程菌（微型生物反应器）的增殖及稳定生产 ——生化工程学原理 ——分子生物学原理 2 基因工程的基本原理 核酸凝胶电泳技术 核酸分子杂交技术 细菌转化转染技术 DNA序列分析技术 寡核苷酸合成技术 基因定点突变技术 聚合酶链反应（PCR）技术 核酸凝胶电泳技术 凝胶板 核酸分子杂交技术 ACCGTAGCTAGGGTTCACACAAATGGCCCGTA CAAGTGTGTTT 细菌转化转染技术 DNA片段 细菌细胞 DNA序列分析技术 双脱氧末端终止测序法的基本反应： Klenow OH 3 5 P T dNTP + ddATP T T T T T OH 3 5 P A G T C GGCATTGCGTTACTAGTCCAGTACA 寡核苷酸合成技术 O H G H H H H O CH 2 O DMT P O Me N CH Me Me CH Me Me H DMT： 二甲氧基三苯甲基 激活 缩合 氧化 脱取代基 玻璃珠 连接臂 聚合酶链反应（PCR）技术 5‘ 5‘ 5‘ 变性 加热 5‘ 5‘ 引物 退火 5‘ 5‘ 底物 聚合 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 加热 变性 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 5‘ 退火 引物 底物 聚合 加热 变性 引物 退火 底物 聚合 1 2 3 2 基因工程的基本原理 C 基因工程的基本原理 B 基因的分子生物学 A 重组DNA技术的理论基础