课件：血液分子生物学基因治疗.ppt

基因治疗Gene Therapy 本章内容提示 基因治疗 (gene therapy) 体细胞基因治疗、生殖细胞基因治疗 基因转移方法 靶细胞特点、靶细胞种类 反义寡核苷酸技术 自杀基因与旁观者效应 基因治疗（Gene therapy?） 基因治疗（Gene therapy?） ：指应用DNA重组技术，将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗的目的。 一、基因治疗策略 策略：直接基因治疗和间接基因治疗 1、直接基因治疗：纠正突变基因 在原位修复缺陷的基因，以达到治疗目的。为较理想的基因治疗策略，由于存在某些问题，目前正在努力之中。（未实现） 途 径 就基因转移的受体细胞不同， 基因治疗有两种途径： 1、生殖细胞基因治疗 2、体细胞基因治疗 1、生殖细胞基因治疗 将正常基因转移到患者生殖细胞（精细胞，卵细胞，早期胚胎）使其发育成正常个体。为理想的治疗方法，从根本上治疗遗传病，使其有害基因不能在人群中散播。 但还存在某些问题： （1）靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性进展； （2）基因转移效率不高，只能用显微注射方法； （3）只适用于排卵周期短而次数多的动物，很难适用于人类。 （但目前辅助生殖技术的发展较为有效的解决了获取卵细胞的办法。一次可获取少者3-5个，多者十几个。） 2．体细胞基因治疗somatic cell gene therapy 将正常基因转移到体细胞，使之表达基因产物，以达到治疗的目的。但有害基因能遗传给后代。 措 施： （1）正常基因转移至体外培养的体细胞，有效 表达后，再回输到体内。 （2）正常基因导入靶细胞，定位整合到染色体 上，准确的替换异常基因，是理想的措施。 （3）随机整合，非特定座位，只要有效的表达 即可达到治疗的目的。 （4）体细胞基因治疗理论上不必矫正所有的体 细胞。 存在的问题 对特定座位基因转移，目前还存在较大困难； 随机插入可能引起后代的基因突变。 二 、基因治疗的方法 基因治疗的关键性步骤---- 目的基因的获得与转移 基因治疗首先获得目的基因，通常从基因组中分离 基因克隆 ↓ 定 位 ↓ 表 达 ↓ 评价表达情况 （二）外源基因的转移 通过不同方法，将目的基因转移至受体细胞。 （1）物理方法 1）电穿孔法（electroporotion）将细胞置于高压脉冲电场中，通过电压使细胞产生可逆性的穿孔。周围基质中的DNA可渗进细胞，进而表达。 瞬间 细胞 细胞膜核膜通透性增加 高压脉冲 DNA渗入细胞 2）显微注射法（microinjection ） 利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞 常用的细胞 （1）受精卵：受精卵→基因操作→注射假孕动物子宫→胚胎→个体。 （2） 胚胎干细胞：从着床前的动物胚胎中分离多功能胚胎干细胞 →基因操作→注射入动物囊胚→形成嵌合体胚胎→嵌合个体。 用显微注射仪将外源基因直接注射入实验动物受精卵中，利用外源基因整合到DNA中，从而得到转基因动物。 特点：导入速度快，操作步骤不复杂，对DNA大小无限制，不需要载体，整合效率较高，它可以直接获得纯系。 缺点：需要贵重精密仪器，技术操作较难，并且外源基因的整合位点和整合的拷贝数都无法控制，易造成宿主动物基因组的插入突变，引起相应的性状改变，重则致死。 例：转基因动物的制备 重组基因 DNA