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课件:血液分子生物学基因治疗.ppt
基因治疗Gene Therapy 本章内容提示 基因治疗 (gene therapy) 体细胞基因治疗、生殖细胞基因治疗 基因转移方法 靶细胞特点、靶细胞种类 反义寡核苷酸技术 自杀基因与旁观者效应 基因治疗(Gene therapy?) 基因治疗(Gene therapy?) :指应用DNA重组技术,将外源正常基因导入靶细胞,以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗的目的。 一、基因治疗策略 策略:直接基因治疗和间接基因治疗 1、直接基因治疗:纠正突变基因 在原位修复缺陷的基因,以达到治疗目的。为较理想的基因治疗策略,由于存在某些问题,目前正在努力之中。(未实现) 途 径 就基因转移的受体细胞不同, 基因治疗有两种途径: 1、生殖细胞基因治疗 2、体细胞基因治疗 1、生殖细胞基因治疗 将正常基因转移到患者生殖细胞(精细胞,卵细胞,早期胚胎)使其发育成正常个体。为理想的治疗方法,从根本上治疗遗传病,使其有害基因不能在人群中散播。 但还存在某些问题: (1)靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性进展; (2)基因转移效率不高,只能用显微注射方法; (3)只适用于排卵周期短而次数多的动物,很难适用于人类。 (但目前辅助生殖技术的发展较为有效的解决了获取卵细胞的办法。一次可获取少者3-5个,多者十几个。) 2.体细胞基因治疗somatic cell gene therapy 将正常基因转移到体细胞,使之表达基因产物,以达到治疗的目的。但有害基因能遗传给后代。 措 施: (1)正常基因转移至体外培养的体细胞,有效 表达后,再回输到体内。 (2)正常基因导入靶细胞,定位整合到染色体 上,准确的替换异常基因,是理想的措施。 (3)随机整合,非特定座位,只要有效的表达 即可达到治疗的目的。 (4)体细胞基因治疗理论上不必矫正所有的体 细胞。 存在的问题 对特定座位基因转移,目前还存在较大困难; 随机插入可能引起后代的基因突变。 二 、基因治疗的方法 基因治疗的关键性步骤---- 目的基因的获得与转移 基因治疗首先获得目的基因,通常从基因组中分离 基因克隆 ↓ 定 位 ↓ 表 达 ↓ 评价表达情况 (二)外源基因的转移 通过不同方法,将目的基因转移至受体细胞。 (1)物理方法 1)电穿孔法(electroporotion)将细胞置于高压脉冲电场中,通过电压使细胞产生可逆性的穿孔。周围基质中的DNA可渗进细胞,进而表达。 瞬间 细胞 细胞膜核膜通透性增加 高压脉冲 DNA渗入细胞 2)显微注射法(microinjection ) 利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞 常用的细胞 (1)受精卵:受精卵→基因操作→注射假孕动物子宫→胚胎→个体。 (2) 胚胎干细胞:从着床前的动物胚胎中分离多功能胚胎干细胞 →基因操作→注射入动物囊胚→形成嵌合体胚胎→嵌合个体。 用显微注射仪将外源基因直接注射入实验动物受精卵中,利用外源基因整合到DNA中,从而得到转基因动物。 特点:导入速度快,操作步骤不复杂,对DNA大小无限制,不需要载体,整合效率较高,它可以直接获得纯系。 缺点:需要贵重精密仪器,技术操作较难,并且外源基因的整合位点和整合的拷贝数都无法控制,易造成宿主动物基因组的插入突变,引起相应的性状改变,重则致死。 例:转基因动物的制备 重组基因 DNA
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