山奈酚对急性短暂性缺氧时大鼠海马CA1锥体神经元电压依赖性钾通道的影响-药理学专业论文.docxVIP

硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 摘要 研究背景和目的：山奈酚(Kaempferol，Kae)是天然总黄酮中 的一个有效活性成分，属于植物性雌激素，广泛存在于中草药和一 些可食性植物中。山奈酚具有显著的神经保护作用。山奈酚可抑制 B一淀粉样肽(13-amyotrophic pepfide，8A)引起的半胱氨酸天冬酶 (Caspase)的激活及细胞色素c的释放、削弱B A引起的中央活性 氧细胞(reactive oxygen species，ROS)的聚积。除此之外，山奈酚 具有对抗B A引起的成神经细胞瘤细胞株(human neuroblastoma cell)和嗜铬细胞瘤(phenochromocytoma cells，PCI2)的损伤、抗幽 门螺杆菌、清除体内自由基、增强机体免疫力、激动雌激素受体、 抑制单胺氧化酶(monoamine oxidase inhibiter,MAOIs)等作用。最 近研究发现山奈酚能够对抗N-甲基一D一天冬氨酸 (N-Methyl—D—Aspartic，NMDA)引起大鼠培养的皮层神经元的损伤。 神经元膜电压依赖性钾离子通道在大鼠海马CAl锥体神经元的迟发 性死亡中起着重要的作用。脑缺血缺氧时，膜电压依赖性钾通道开 放，细胞内K+外流增加，胞内K+减少，ca8内流增多，进而诱导神经 元迟发性程序性死亡。某些电压依赖性钾通道阻断剂可以通过抑制 电压依赖性钾通道的激活，减少细胞内ca“内流，从而对受损神经元 起到保护作用。我们推测，山奈酚对神经元的保护作用除可对抗B A 引起的神经毒性之外，也可能与通过其对电压依赖性钾通道的影响 中文摘要发挥作用。本实验采用全细胞膜片钳技术，研究山奈酚对正常和缺 中文摘要 发挥作用。本实验采用全细胞膜片钳技术，研究山奈酚对正常和缺 氧时大鼠海马CAl区锥体神经元膜电压依赖性钾通道的影响。 方法： ①急性分离海马CAI神经元：2～8天Sprague．Dawley (SD)大鼠断头取脑，分离出海马区域，置于含ProteaseXIII孵育液中 进行消化，6～8分钟后将脑组织取出，手工切成约400 1．t m的脑片， 然后在含胰酶抑制剂(trypsin inhibitor)季ll牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BAS)的孵育液中孵育1～2小时，然后在显微镜下分离出 海马CAl区神经元。②急性短暂性模拟缺氧：用含有60岫ol_L。氰 化钾(potassium cyanide，KCN)的细胞外液灌流海马CAl神经元模拟 缺氧。③全细胞记录：采用EPC一9(HEKA，Germany)膜片钳放大器 进行全细胞膜片钳记录。钳制电压为一50my，记录电流时的滤波频率 2kHz，采集频率为10～40kSz，信号采集与储存采用pClamp 6．02软 件，数据分析采用Origin 6．0软件进行分析。 结果：①山奈酚可抑制电压依赖性钾通道，对正常和缺氧时电 压依赖性钾通道均有抑制作用。当去极化到+60mV时，对I。和I。抑制 率分别为77．3 4-7．1％和40．5 4-10．o％。②山奈酚对IA和I。的抑制 具有浓度依赖性，对工A和I。的Ic5。分别为53．96 4-6．679m01．Ll和 81．52 4-9．339m01．L～。③山奈酚对IA和I。的抑制具有可逆性，用标 准外液洗脱后，电流恢复到原来的电流。④山奈酚对I。和I。的抑制 具有电压依赖性，去极化电压从一70mV到+60mV时，山奈酚明显降低 硕+学位论文 硕+学位论文 中文摘要 I。和I。的I／V曲线，即减小I。和I。，并且在不同膜电位下减小的程 度不同。 结论：①山奈酚对正常和缺氧时大鼠海马CAl区锥体神经元电 压依赖性钾通道有阻断作用，能同时降低I。和I。。②其对钾通道的 抑制作用可能参与脑缺血缺氧保护。 关键词 山奈酚，海马，锥体神经元，电压依赖性钾通道，脑缺氧 III 硕士学位论文 硕士学位论文 英文摘要 Abstract Background and purpose： Kaempferol is SO called phytoestrogens，an activitive constituent of nature flavone，Occur ubiquitously in food plants and herbal medicines．Many pharmacological effects of kaempferol have been widely reported．Kaempferol abrogated 13 A—induced the acviation of caspase cascade and cytochrome C rele