扇贝抗氧化活性肽的制备及其活性的研究-遗传学专业论文.docxVIP

Classified Index: S917.4 U.D.C: 570 Dissertation for the Master Degree in Science PREPARATION OF SCALLOP OXIDATION ACTIVE PEPTIDE AND THE ACTIVITY RESEARCH Candidate： Zhang Lili Supervisor： Associate Prof. Wang Junhu Academic Degree Applied for： Master of Science Speciality： Genetics Affiliation： School of Marine Science and Technology Date of Defence： June, 2013 Degree-Conferring-Institution： Harbin Institute of Technology 哈尔 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文 - -I- 摘 要 氧化是导致人类疾病和发病的主要原因之一。例如，自由基攻击蛋白质、 脂质以及核苷酸导致细胞损伤和凋亡，进而可导致组织损伤，引起机体衰老， 诱发肿瘤等恶性疾病。本质上，所有的细胞组分和特定的成分都易受到自由基 的影响。经过大量研究证明，抗氧化肽能够起到清除自由基、螯合金属离子等 作用。而扇贝（Scallop）在我国是重要的海洋贝类资源, 从北到南贯穿整个沿海 地区都大量生产。不但营养丰富, 美味可口, 而且还具有多种保健功能。因此本 文选用栉孔扇贝（Chlamys farreri）作为研究对象，利用生物酶解法制备扇贝抗 氧化活性肽，进而研究其对秀丽隐杆线虫（C. elegans）寿命的影响。 本文选用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和复合风味蛋白酶，通过三种酶解方式（单 酶酶解、复配酶酶解和分段酶解）对扇贝蛋白进行酶解。并以扇贝蛋白酶解液 的羟基清除能力和多肽得率作为主要考察指标、水解度为参考指标，对三种酶 解方式进行比较分析，从而确定制备扇贝蛋白抗氧化活性肽的最佳酶解方式是 单酶酶解中的胰蛋白酶酶解；通过正交设计助手 IIV3.1 对扇贝蛋白的酶解条件 进行优化，获得制备扇贝蛋白抗氧化活性肽的最佳酶解工艺 。在此条件下制得 的扇贝蛋白酶解液的羟基清除能力（SA）为 91.09%，半数抑制浓度（SC50）为 35%，肽得率为 56.69%，水解度（DH）为 73.25%。 将 最 佳 酶 解 条 件 下 制 备 的 扇 贝 蛋 白 酶 解 液 进 行 超 滤 、 分 子 筛 层 析 （SEC,Superdex Peptide 10/300 GL）及高效液相色谱（HPLC,Zorbax 300SB-C18 4.6×250 5μm）等分离纯化方法的处理，从而得到较高纯度的抗氧化活性肽，其 分子量为 0.1-5 KD，并推测其肽链长度为 4-14 个氨基酸。 以秀丽隐杆线虫作为长寿实验的研究对象，通过在线虫培养基中分别加入 三种不同浓度（占培养基比例分别为 0.1%、1%和 10%）的扇贝蛋白酶解液和经 分离纯化后得到的具有较高抗氧化活性的扇贝蛋白肽（＜10 KD）喂养线虫，与 大肠杆菌 OP50 对照组进行对比；在线虫寿命期间，对线虫存活、死亡的数量及 活性等进行观察和记录，并利用 SPSS 软件对其记录的数据进行处理与分析，最 终得出结论即扇贝蛋白抗氧化活性肽（＜10 KD）对线虫寿命具有较为显著的延 长效果。 关键词：栉孔扇贝；抗氧化活性肽；酶解工艺；分离纯化；线虫寿命 - -II- Abstract Oxidation is one of the main reasons for human disease and pathogenesis. Such as free radicals attack protein, lipid, and nucleotides to cause cell damage and apoptosis, which can lead to tissue damage, cause the bodys aging, and induce the malignant diseases such as cancer, etc. In essence, all the cell components and special ingredients are vulnerable to be influenced by free radicals. It has been demonstrated that antioxidant peptides can scavenge free radicals, chelat