雷公藤内酯醇单独以及联合硼替佐米对人霍奇金淋巴瘤细胞株L428的作用研究-内科学(血液病)专业论文.docxVIP

浙江人学硕十学位论文年来的研究发现TPL还具有显著的抗肿瘤作用，我们前期的实验研究表明其对 浙江人学硕十学位论文 年来的研究发现TPL还具有显著的抗肿瘤作用，我们前期的实验研究表明其对 骨髓瘤细胞株亦有较好疗效 ，但TPL对霍奇金淋巴瘤细胞株的作用目I；{f尚未见 有报道。蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib，PS-341，VELcADE)近年来在多 发性骨髓瘤的治疗中取得较好的疗效，也用于非霍奇金淋巴瘤的治疗，其机制主 要通过下调核因子K B(NF K B)或者调控细胞周期蛋白和细胞凋亡通路而具有抗 肿瘤作用“““脚，但是是否可用于霍奇金淋巴瘤的治疗尚无报道以及相关的临 床资料。本实验旨在进一步研究TPL单独以及联合PS．341对霍奇金淋巴瘤细胞 株的作用并初步探讨可能的作用机制，结合前人研究完善TPL对血液系统B细胞 等恶性肿瘤的作用研究，为临床应用提供理论依据。 【方法l 1．采用MTT比色法检测TPL单独以及联合PS．341对霍奇金淋巴瘤细胞株L428 体外生长的抑制作用。 2．瑞氏一姬姆萨(Wright-Giemsa)染色，油镜下观察细胞形态。 3．应用流式细胞仪，AnnexinV和P1双染色，周期分析检测细胞凋亡。 4．western-blot法检测TPL单独以及联合PS-341对IA28细胞caspase3、9，PARP， Bcl．2家族蛋白Bcl-2和Bax表达水平的影响。 I结果l 1．TPL、PS．341单独以及联合对L428细胞的生长的影响： MTT比色法检测结果显示，5--500ng／ml TPL处理L428细胞24h、48h、 72h，细胞增殖明显受抑制，各组间差异显著(P值均小于0．001)。且生长抑制率 与药物作用浓度呈正相关(P0．001)。TPL处理细胞24h、48h、72h后，L428 溉江人学硕{：学位论文的IC50分别各为901．31ng／ml：12．13ng／ml：8．686rig／m1。当采用5--500ng／ml 溉江人学硕{：学位论文 的IC50分别各为901．31ng／ml：12．13ng／ml：8．686rig／m1。当采用5--500ng／ml 的TPL联合80ng／mlPS-341作用于L428细胞24小时，L428细胞生长明显受抑 制，IC。降为7．246ng／ml，比TPL单药作用增强124．56倍，其抑制效果明显优 于单药处理，细胞抑制率与药物浓度呈正相关。 2．TPL单独与联合PS．341对L428细胞凋亡的影响： 采用瑞氏一姬姆萨染色，油镜下观察TPL作用前后1．428细胞形态学变化， 结果显示，5-200ng／n11的TPL处理48小时后，L428细胞出现典型的凋亡形态 学特征：细胞体积缩小，胞浆空泡化，细胞核染色质凝聚、边缘化，形成新月型 核或环形核，细胞核碎裂，凋亡小体形成等。以流式细胞分析技术研究了细胞 DNA含量、亚二倍体及磷脂酰丝氨酸(PS)转位。L428细胞用0-200ng／ml TPL 处理48小时，PI的DNA染色结果显示亚二倍体凋亡细胞百分数(重复三次，以 X+SD表示)分别为：0．05％±0．04，3．40％±1．18，4．69％±0．89，13．98％ ±0．69，15．68％±1．28。L428细胞分别用5ng／ml TPL、80ng／mlPS一341处理24h， 5ng／ml TPL联合80ng／mlPS一341处理细胞24h，亚二倍体凋亡细胞百分数(重复 三次，以X+SD表示)分别为0．02％±O，0．91％±1．14，4．89％±O．15，18．41 ％±3．84。细胞凋亡率与药物作用浓度正相关：r=O。782，P值小于0．01。L428 细胞用5--500ng／ml TPL处理细胞48h，AnnexinV—PI双标记法结果显示早期凋 亡细胞百分数(重复三次，以X±SD表示)分别为：4．86％±0．32，9．65％± 0．40，11．19％+2．41，15．3％±1．18，23．24％±3．56(空白对照组为0．64％±O．21)， 细胞凋亡率与药物作用浓度呈正相关(r=O．784，PO．01)；L428细胞用5ng／ml TPL、80ng／m1PS一341以及用5ng／ml TPL联合80ng／m1PS一341处理24h，早期凋 亡细胞百分数(重复三次，以x±SD表示)分别为：3．47％±0．21，4．21％± 4 浙江人学硕十学位论文0．57，10．68％±1．57(空白对照组为O．64％±0．21)，细胞凋亡率与药物作用浓 浙江人学硕十学位论文 0．57，10．68％±1．57(空白对照组为O．64％±0．21)，细胞凋亡率与药物作用浓 度正相关(r=O．687，PO．01)。 3．TPL单独以及联合PS一341对L