不同工艺提取竹节参皂苷粗提物毒性和其抗炎作用初步探究.docxVIP

不同工艺提取竹节参皂昔粗提物毒性和其抗炎作用初步探究 摘要：目的比较不同工艺提取的竹节参皂昔粗提 物的毒性及抗炎效果。方法采用不同工艺分别制备竹节参 皂昔粗提物样品1、样品2、样品3、样品4、样品5^样品 6,然后用不同工艺、不同浓度的样品处理RAW264. 7细胞， 显微镜下观察细胞形态，曝吐蓝（MTT）法检测细胞活力， 一氧化氮（NO）试剂盒检测RAW264. 7细胞NO释放量。结果 不同样品作用于RAW264. 7细胞毒性从小到大依次为：样品4 样品5＞样品2＞样品6＞样品1＞样品3o结论6种不同提取工 艺得到的竹节参皂昔粗提物中，泡沫分离法提取的竹节参皂 昔粗提物毒性最小，抗炎效果最好。 关键词：皂昔；提取工艺；竹节参皂昔粗提物；抗炎； 细胞活力 竹节参及其活性成分竹节参总皂昔具有抗炎、镇痛、免 疫调节、抗氧化活性等多种药理活性，且不同提取方法对竹 节参皂昔生物活性的影响很大[1-5] o本研究采用不同工艺 提取竹节参中的皂昔成分，并建立脂多糖（LPS）致RAW264. 7 细胞炎症模型，对竹节参不同工艺提取的皂昔粗提物的毒性 及抗炎活性进行了初步研究，以期为竹节参提取工艺及深入 研究提供实验依据。 1实验材料 1.1药物、细胞与试剂 竹节参采于湖北恩施椿木营竹节参种植基地，经三峡大 学湖北省天然产物研究与利用重点实验室邹坤教授鉴定为 五加科人参属植物Panax japonicus C. A. Meyo小鼠单核巨 噬白血病细胞株RAW264. 7购于中国科学院上海细胞库。DMEM 高糖培养基,Gbico公司，批号884684；胎牛血清，杭州四 季清公司，批号100607； LPS （B5： 055）, Sigma公司，批 号110M4086V； —氧化氮（N0）检测试剂盒，上海碧云天生 物技术有限公司，批号S0021-3o 1.2仪器 NU-4750E型二氧化碳培养箱（NuAire公司）；SW-4T-2F 洁净工作台（上海博讯实业有限公司医疗设备厂），CKX41倒 置显微镜（日本奥林巴斯公司），TD25-WS多管架自动平衡离 心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司），Thermo全波长 酶标仪（芬兰，TECAN INPINIFETMF 200）□ 2实验方法 2. 1样品制备 2. 1. 1乙醇加热回流提取法参照文献［6］方法。竹节参 药材100 g, 10倍量60%乙醇加热回流提取3次，2 h 1次, 合并提取液并减压回收溶剂至无醇味，80 9水浴，浓缩至 原药材质量5倍，滤除不溶亲脂性杂质，上清液用水饱和正 丁醇等量萃取3次，回收正丁醇，然后加入适量85%乙醇溶 液溶解竹节参总皂昔粗提物，并不断搅拌缓慢加入丙酮，常 温静置，待沉淀完全析出，3500?4000 r/min离心15 min, 收集沉淀物，并用适量丙酮洗涤，减压真空干燥，得提取物 粉末样品lo 2. 1.2乙醇超声提取法 竹节参药材100 g,置锥形瓶中, 加入60%乙醇500 mL,超声处理（功率250 W,频率50 kHz） 40 min,摇匀，滤过，重复提取3次，合并滤液，回收溶剂, 减压真空干燥，得提取物粉末样品2。 2. 1.3水饱和正丁醇超声提取法竹节参药材100 g,置 锥形瓶中，加入水饱和正丁醇500 mL,超声处理（功率250 W,频率50 kHz） 40 min,摇匀滤过，重复提取3次，合并 滤液，回收溶剂，然后加入适量85%乙醇溶解竹节参总皂昔 粗提物，并不断搅拌缓慢加入丙酮，常温静置，待沉淀完全 析出，收集沉淀物，并用适量丙酮洗涤，减压真空干燥，得 提取物粉末样品3o 2. 1.4泡沫分离提取法竹节参药材100 g, 10倍量纯 水加热回流提取3次，提取液浓缩至500 mL,调pH值至4. 88, 加入到泡沫分离装置中，控制气体流速为400 mL/min,进行 分离，收集泡沫，乙醇消泡，分离结束后挥干溶剂，减压真 空干燥，得提取物粉末样品4。 2. 1.5水提醇沉提取法竹节参药材100 g, 10倍量双 蒸水提取3次，2 h 1次，合并滤液浓缩至原药材质量的5 倍，加60%乙醇静置过夜，悬浊液于3500 r/min离心15 min, 上清液水饱和正丁醇等量萃取3次，回收正丁醇，然后加入 适量85%乙醇溶液溶解竹节参总皂昔粗提物，并不断搅拌缓 慢加入丙酮，常温静置，待沉淀完全析出，收集沉淀物，并 用适量丙酮洗涤，减压真空干燥，得提取物粉末样品5。 2. 1.6大孔吸附树脂提取法竹节参药材100 g, 10倍 量双蒸水提取3次，2 h 1次，合并滤液后浓缩至原药材质 量的5倍，加95%乙醇至乙醇终浓度为60%,静置过夜，悬 浊液于3500 r/min离心15 min,上清液水饱和正丁醇等量 萃取3次，回收正丁醇。然后用60%乙醇洗脱