人参内生细菌NJ13在宿主体内定殖特性和对人参黑斑病防治效果.docxVIP

人参内生细菌NJ13在宿主体内定殖特性和对人参黑斑病防治效果 ［收稿日期］2013-10-22 ［基金项目］吉林省科技厅重点科技攻关项目 (20140204055NY )；国家大学生创新创业训练计划项目 (201310193001) ［通信作者］*陈长卿，副教授，研究方向为药用植物病 害生物防治，E-mail： ccqjy@163. com ［摘要］为明确人参内生生防细菌NJ13在宿主体内的定 殖特性，该研究通过抗生素诱导获得了同时对利福平和硫酸 链霉素具有稳定抗性的双抗标记菌株NJ13-R,分析了菌株在 宿主体内的定殖特性，并研究了 NJ13对人参黑斑病的田间 防治效果。结果表明，菌株在人参根、茎、叶部均可定殖， 而且定殖量与接种浓度呈正相关。菌株可在人参不同部位侵 染植株并在体内进行转移，在根部和叶部定殖量表现为先升 后降的变化趋势，而在茎部呈先升高后平缓趋势。研究还发 现，生防细菌NJ13表现出对宿主特定部位具有一定的偏好 性，随着时间推移在茎部的定殖量高于其他部位。田间试验 证明，生防细菌NJ13对人参黑斑病具有较好的防治作用， 其中0. 76X108 cfu - mL-1发酵液防效达75. 62%,高于对照 药剂0. 67 mg ? L-1 50%囉菌环胺WG的防效(73. 06%)。 ［关键词］内生细菌；定殖；人参黑斑病；生物防治 人参Panax ginseng CA Mey为五加科人参属多年生宿 根草本植物，是我国传统的名贵中草药，素有“百草之王” 的美誉，主要分布在我国东北长白山地区。由链格胞菌 Alternaria panax Whetz.引起的人参黑斑病，是人参生产 上发生最为普遍、分布最为广泛、为害最为严重的病害之一。 该病害主要为害人参地上部，包括叶片、茎秆、花梗和果实 等部位，尤以叶斑和茎斑发生最为普遍，吉林省髙发期集中 在7 — 8月份，常年发病率在20%?30%,严重时可达80? 100%,造成早期落叶、植株枯萎、不结实，参根和参籽减产, 品质下降［1］。目前，生产上人参黑斑病主要以化学防治为 主，然而在病害防治过程中化学农药的不科学使用, 主，然而在病害防治过程中化学农药的不科学使用, 暴露出 了人参农药残留超标、出口率降低、病原菌抗药性产生以及 污染生态环境等系列问题。因此，生物防治等更为安全有效 的防治措施研究亟待开展。 目前国内外关于人参黑斑病生物防治的研究报道相对 较少，主要集中在生防菌的分离筛选及发酵条件研究。崔立 萍等［2］从土壤和人参黑斑病菌组织中分离筛选出对人参黑 斑病菌有拮抗作用的菌株22个。李勇等［3］从人参根中分离 出40株内生细菌，通过对峙培养筛选获得了对人参黑斑病 菌有抑制作用的内生细菌Stenotrophomonas maltophilia 和Bacillus sp. o周如军等［4-5］从人参根际土壤中筛选到 对人参锈腐病菌有拮抗活性的细菌2株和真菌1株，其对人 参黑斑病菌有一定的抑菌效果，并对上述菌株进行了鉴定及 最适发酵条件研究。 生防菌在植物体内的有效定殖是其控制植物病害的关 键，因此，明确生防菌的定殖特性是揭示其生防机制和评价 其应用潜力的重要依据。而目前关于人参内生菌的定殖及人 参黑斑病田间生物防治研究还未见报道。本课题组从人参茎 部分离获得了1株对人参主要病害病原菌具有较好抑菌活性 的内生细菌菌株NJ13,经鉴定为甲基营养型芽砲杆菌 Bacillus methylotrophicus,明确了最适发酵培养条件［6］。 为进一步挖掘NJ13菌株的生防潜力，本研究拟对菌株在人 参体内的定殖特性及其对人参黑斑病的田间防治效果进行 分析，为开展该菌株更为广泛的生物防治及相关研究奠定坚 实的基础。 1材料 1供试菌株及培养基 供试生防菌株NJ13 B. methylotrophicus,由本课题组分离获得；人参黑斑病菌A. panax由吉林农业大学植物病理实验室提供。 NJ13按常规方法在NA （牛肉膏蛋白淼培养基）上繁殖 保存，其发酵培养基为葡萄糖3%、可溶性淀粉1.5%,酵母 浸粉 1.5%, K2HP04 0. 1%, NaCl 0. 5%,起始 pH 8.0；靶标 菌在常规PDA （马铃薯葡萄糖琼脂培养基）上繁殖保存。 2试验药剂利福平(rifampicin, Rif)和硫酸链 霉素(streptomycin sulfate, Stre),购于北京鼎国生物 技术有限公司，分别使用甲醇和无菌水溶解。50%囉菌环胺 WG购于先正达中国投资有限公司。 2方法 1 NJ13菌株发酵液的制备将NJ13菌株划线接种于 NA平板培养基上，28工培养2d。待菌落长好后用直径lcm 的打孔器打取2块菌碟，接种于灭菌的LB培养液(胰蛋白 M 10 g,酵母浸粉 5 g,