人参皂苷Ro碱水解动力学探究和水解产物结构解析.docxVIP

人参皂昔Ro碱水解动力学探究和水解产物结构解析 ［摘要］研究人参皂昔Ro在碱性条件下的稳定 性，考察了不同温度不同pH下人参皂昔Ro的水解情况，结 果发现水解符合一级动力学反应。水解速率与水解温度和水 解体系的pH相关，相同的水解温度，pH越高，水解越快； 相同的pH,温度越高水解越迅速。对水解产物进行分离，通 过质谱、核磁等手段鉴定水解产物为姜状三七皂昔R1 (zingibroside-Rl)o该研究为评价人参皂昔Ro环境特性 提供一定依据，也为姜状三七皂昔R1的制备提供一种方法。 ［关键词］人参皂昔Ro；水解动力学；结构解析；姜状 三七皂昔R1 ［收稿日期］2013-10-09 ［通信作者］*柳文媛，教授，博士生导师，E-mail： liuwenyuan8506@163.com； *叶正良,研究员，硕士生导师， E-mail： yezl@tasly. com ［作者简介］朱琼，硕士研究生，E-mail : happyzhuqiong@126? com 人参皂昔Ro (ginsenoside-Ro)为齐墩果烷型人参皂昔, 又被称为竹叶参V,存在于人参［1］、牛膝、竹叶参中［2］。 具有表面活性剂作用，对柴胡皂昔具有增溶的作用［3］,能 促进细胞增生，调节小鼠脾细胞Thl/Th2型细胞因子的产生 [4],能促进毛发生长[5-6],人参皂昔Ro还能抑制5a-还 原酶和抗慢性心绞痛的作用[7]。人参皂昔Ro不稳定[8], 在加热条件中酯昔键易破坏，这种报道大多集中在定性分解 及通过结构物质推测其产物。人参皂昔Ro结构中含有酯昔 键，在碱性条件中易发生水解，但目前尚无人参皂昔Ro在 碱性条件下的水解动力学研究报道。本文主要为了研究人参 皂昔Ro在碱性条件下的结构和含量变化规律，为含有人参 皂昔Ro的中药制剂的生产过程控制提供参考，也为含有人 参皂昔Ro的中药制剂稳定性评价提供依据。因此本文进行 了人参皂昔Ro在碱性条件下的水解动力学研究，并且对碱 水解产物的结构进行了结构鉴定。 1材料 人参皂昔Ro对照品（天津马克生物科技有限公司，纯 度为99%,批；氯仿为分析纯，甲醇、乙惰为 色谱纯（德国Merck公司），磷酸为色谱纯（天津市光复精 细化工研究所），超纯水为实验室自制；Waters e2695高效 液相色谱仪‘Waters 2489紫外检测器，岛津UFLC-IT-TOF, Bruker 400M核磁共振仪，Milli-Q超纯水系统（美国 Millipore公司），XS105梅特勒精密电子分析天平（上海梅 特勒-托利多仪器上海有限公司）。 2方法与结果 2. 1人参皂昔Ro水解产物测定 2. 1. 1 色谱检测条件 Waters Symmetry C18 柱(4. 6 mmX250 mm, 5 Pm)；流动相乙睛-0?05%磷酸；梯度洗脱， 0?20 min, 30%?70%乙月青；流速1 mL ? min-1 ；检测波长 203 nm；柱温30 °C；进样量10 uLo人参皂昔Ro水解结 果见图lo 空白；2?对照品；3?水解样品；a.人参皂昔Ro； b. 姜状三七皂昔R1。 图1人参皂昔Ro水解HPLC图 Fig. 1 HPLC chromatogram of the hydrolysis kinetics of ginsenoside-Ro 1.2标准曲线的绘制 取人参皂昔Ro对照品适量，配 制成质量浓度为0.60 g?L-1的储备液，分别稀释5, 10, 20, 40, 80, 160倍，分别吸取上述不同质量浓度的人参皂 昔Ro对照品10 UL进样，测定其峰面积。以人参皂昔Ro 的进样质量为横坐标(X),色谱峰的峰面积(Y)为纵坐标, 进行线性回归，得标准曲线方程Y二3 346 554X+174 456, (—0.999 9, n二6),表明人参皂昔 Ro 在 3. 75X10-3?0. 12 g ? LT呈良好的线性关系。 2. 1.3检测限的测定 取人参皂昔Ro适量，配制成合适 浓度，进样检测，当信噪比为3时，检测浓度为3. 73 ngo 2.1.4定量限的测定 取人参皂昔Ro适量，配制成合适 浓度，进样检测，当信噪比为10时，该浓度为14. 92 ngo 且将该浓度的人参皂昔Ro对照品连续进样6次，其RSD为 0. 7%,说明定量准确。 2. 1.5精密度试验吸取人参皂昔Ro对照品溶液10 UL,连续进样6次，其RSD为0.4%,表明测定条件精密度 良好。 2. 1.6稳定性试验 将人参皂昔Ro对照品溶液放置0,2, 4, 8, 12, 24 h后分别测定其峰面积，RSD为1. 7%,表明溶 液稳定性良好。 2.2人参皂昔Ro碱水解动力学模型的建立 2. 2. 1水解实验过程 取人参皂昔Ro对照