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四、课题成果评价 (一)培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1~2 d后无菌落生长,说明培养基的制备是成功的,否则需要重新制备。 (二)接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致,并符合大肠杆菌菌落的特点,则说明接种操作是符 合要求的;如果培养基上出现了其他菌落,则说明接种过程中,无菌操作还未达到要求,需要分析原因,再次练习。 (三)是否进行了及时细致的观察与记录 培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同,及时观察记录的同学会发现这一点,并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。 【典例解析】 例1.关微生物营养物质的叙述中,正确的 A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 答案:D 解析:不同的微生物,所需营养物质有较大差别,要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项,它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源,如二氧化碳;有的碳源可同时是氮源,如NH4HCO3;有的碳源同时是能源,如葡萄糖;有的碳源同时是氮源,也是能源,如蛋白胨。对于C选项,除水以外的无机物种类繁多,功能也多样。如二氧化碳,可作为自养型微生物的碳源;NaHCO3,可作为自养型微生物的碳源和无机盐;而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项,无机氮源提供能量的情况还是存在的,如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。 例2.下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前 答案:B 解析:灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的,因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种,整个发酵过程不能混入其他微生物(杂菌),所以是正确的;B是错误的,因为灭菌的目的是防止杂菌污染,但实际操作中不可能只消灭杂菌,而是消灭全部微生物。C是正确的,因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌;发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的,灭菌必须在接种前,如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。 编号 成分 含量 ① 粉状硫 10g ② (NH4)2SO4 0.4g ③ K2HPO4 4.0g ④ MgSO4 9.25g ⑤ FeSO4 0.5g ⑥ CaCl2 0.5g ⑦ H2O 100ml 例3.右表是某微生物培养基成分,请据此回答: (1)右表培养基可培养的微生物类型是 。 (2)若不慎将过量NaCl加入培养基中。 如不想浪费此培养基,可再加入 。 自养型微生物 含碳有机物 (3)若除去成分②,加入(CH2O),该培养基可用于培养 。 (4)表中营养成分共有 类。 (5)不论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是 。 (6)右表中各成分重量确定的原则是 。 (7)若右表培养基用于菌种鉴定,应该增加的成分 。 固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂(或凝固剂) * 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法:70-75 ℃下煮30min 或80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用70%酒精、新 洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 …… (1)消毒的方法: 3.常用的消毒与灭菌的方法 1、灼烧灭菌 (2)灭菌的方法: 2、干热灭菌: 160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌: 100kPa、121 ℃下维持15-30min. 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌,它可以杀灭所有的生物,包括最耐热的某些微生物的休眠体,同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌,特别是空气中的杂菌污染,试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口,通常采用棉花塞,也可采用各种金属、塑料及硅胶帽,它们只可让空气通过,而空气中的其他微生物不能通过。 培养基分装完毕以后,在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染,保证通气良好,加棉塞时,应使棉塞长度的2/3在试管口内,如上图所示。 加棉塞 分类 定义 方法 灭菌法 杀灭一切微生物 物理法:热力、辐射、微波、等离子体 化学法:醛类、烷化剂 高程度消毒法 杀灭一切致病微生物 紫外线、微波、热力、含氯剂、臭氧等 中程度消毒法 杀灭除芽孢外的致病微生物 超声波、碘类、醇类、酚类 低程度消毒法 杀灭细菌繁殖体、亲脂病
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