外翻肠囊吸收成分和药效相关探究吴茱萸汤治疗偏头痛药效物质.docxVIP

外翻肠囊吸收成分和药效相关探究吴茱萸汤治疗偏头痛药效物质 ［摘要］吴茱萸汤是治疗虚寒性偏头痛的经典方剂， 其与偏头痛治疗相关的有效成分尚不明确。该实验米用大鼠 外翻肠囊模型获取10种吴茱萸汤的吸收样品，以HPLC-DAD 对吴茱萸汤及外翻肠囊吸收样品中9种成分进行定量、半定 量，得到各成分在汤中的含量及在肠囊中的累积吸收量。同 时建立利血平化小鼠偏头痛动物模型，在给予吴茱萸汤治疗 后测定脑组织内5-務色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT), 去甲肾上腺素(noradrenaline, NE),多巴胺(dopamine, DA)及脑组织与血清内一氧化氮(nitric oxide, NO)及其 合成酶(nitricoxide synthase, NOS)的含量与活力。最 后运用偏最小二乘回归法(partial least squares regression, PLSR)对各成分总吸收量与药效指标进行相关 分析，发现了外翻肠囊吸收成分中影响药效的主要成分是柠 檬 黄 素 -3-0- B _D~ 葡 萄 糖 昔 (limocitrin-3-O-3 -D-glucoside, Les),人参皂昔 Rgl (ginsenoside Rgl, Rgl),人参皂昔 Rbl (ginsenoside Rbl, Rbl)、吴茱萸苦素(rutaevine, Rv)、柠檬苦素(limonin, Li )、吴茱萸碱(evodiamine , Ev )及吴茱萸次碱 (rutaecarpine, Ru),其中 Rgl, Rv, Ev 及 Ru 对多数药效 指标具有正向改善作用，可能是影响吴茱萸汤治疗偏头痛作 用的主要成分。 ［关键词］吴茱萸汤；偏头痛；外翻肠囊吸收谱效相关; 偏最小二乘回归；药效物质 ［收稿日期］2013-08-17 ［基金项目］北京市教育委员会科技计划面上项目 (SQKM201210025011)；首都中医药研究专项重点课题项目 (13ZY02) ［通信作者］*龚慕辛，博士，博士生导师，从事中药复 方物质基础研究，Tel : ( 010 ), E-mail : gongmuxin@126. com ［作者简介］潘学强，硕士研究生，E-ma订： pxq_xq@163. com 吴茱萸汤出自《伤寒论》，现代临床上主要用于治疗多 种头痛［1］。全方由吴茱萸、生姜、人参及大枣4味中药组 成。曾有学者采用化学分析与药理相结合的方法对其药效物 质进行研究［2-3］,但由于缺乏成分分析与治疗偏头痛相关 药效指标的关联，使其有效成分尚不明确，影响了质量控制 与治疗作用的优化。本实验将10种吴茱萸汤中的9种成分 在外翻肠囊的累积吸收量与偏头痛药效指标相关联，采用 PLSR进行分析，并与吴茱萸汤谱效相关结果进行对比，以发 现吴茱萸汤吸收成分中影响药效的主要成分，为其治疗偏头 痛的药效物质研究提供参考。 1材料 ICRQiALC-M组织-器官恒温水浴系统（上海奥尔科特生物技术 ICRQi 有限公司）；Agilent 1100系列高效液相色谱系统， Chemstation色谱工作站，含四元泵、自动进样器、DAD检 测器（Agilent公司）；ESA高效液相色谱系统，Coularry工 作站，含二元泵，自动进样器，电化学检测器（ESA公司）； MG-2200 氮吹仪（EYELA 公司）；Silent Crusher M 匀浆仪 （Heidolph公司）；3K15低温高速离心机（Sigma公司）； UV-2450紫外可见分光光度计（SHIMADZU公司）；SpectraMax Plus 384酶联免疫检测仪（Molecular Devices公司）； DV215CD电子分析天平（Sartorius公司）；KQ-250超声波清 洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 利血平注射液（广东邦民制药厂有限公司，批号 100509）；琥珀酸舒马普坦片（天津华津制药有限公司，批 号2F69151）；注射用青霉素钠（中诺药业有限公司，批号 016110691）； N0测定试剂盒（批, N0S测定试 剂盒（批,考马斯亮蓝试剂盒（批, 均购自南京建成生物工程研究所；吴茱萸碱（批号 110801-200908 , 纯度99. 7% ）,吴茱萸次碱（批号 110801-201207 , 纯度99.4% ）,柠檬苦素（批号 110800-201205 , 纯度88. 5% ）,人参皂昔Rgl （批号 110703-201128 ,纯度93. 4% ）,人参皂昔Re （批号 110754-201123 ,纯度 89. 1% ）,人参皂昔 Rbl （批号 110704-201223 , 纯度 9