利用分子印迹技术从中药粗提物中定向分离胡黄连苷Ⅱ探究.docxVIP

利用分子印迹技术从中药粗提物中定向分 离胡黄连昔II探究 ［摘要］胡黄连昔II为神经保护的中药活性成分， 但其传统的分离工艺较复杂，效率较低，溶剂用量大，环境 不友好，而分子印迹技术是一门分子识别技术，其制备的分 子印迹聚合物因具有特异性结合位点而对目标分子有较高 的选择吸附性，能够克服传统分离技术的以上缺点。该研究 以胡黄连昔II为模板，采用沉淀聚合法制备了胡黄连昔II的 分子印迹聚合物，并对其性能进行了研究。结果表明合成的 聚合物微球不仅表面光滑，大小均匀，而且Scatchard分析 得出胡黄连昔II分子印迹聚合物的最大表观结合位点数 Qmax3. 02 mg ? g-1,远远高于其空白印迹聚合物。充分证明 利用沉淀聚合法可以合成形貌和靶向吸附能力均较好的黄 连昔II分子印迹聚合物，可用于从中药粗提物中靶向分离胡 黄连昔II及其结构类似物，有利于减少中药提取分离过程中 有机溶剂的使用，环境友好，且操作简便，为中药胡黄连昔 II的高效分离提供了新的方法。 ［关键词］胡黄连昔II;分子印迹技术；沉淀聚合法 胡黄连昔II (picrosideII )是玄参科植物胡黄连的主 要成分，具有促进神经干细胞增殖的功能。目前胡黄连昔II 的提取分离通常采用溶剂提取法、水蒸汽蒸憎法和大孔树脂 吸附法等传统方法，但这些方法工艺复杂、试剂消耗大、环 境不友好，因此寻找新的方法从中药粗提物中快速高效地分 离出胡黄连昔II及其结构类似物具有重要的意义。分子印迹 聚合物（molecularly imprinted polymers, MIPs） 是 1 种对目标分子具有特异性识别和结合能力的聚合物，诺贝尔 奖获得者PaulingEl］首先提出了可利用抗原作为模板来铸 造抗体的空间结合位点理论，Dickey［2］首先实现了染料在 硅胶中的印迹并提出分子印迹”的概念。本文采用沉淀聚 合法合成了以胡黄连昔II为模板分子的MIPs,研究表明其对 目标分子具有较高的选择吸附性，且此方法克服了传统分离 方法的缺点，为中药有效成分及其类似物的提取分离提供了 更加高效的方法。 1材料 UV-2550型紫外-可见分光光度计（日本岛津公司），FEI Quanta 200F扫描电子显微镜（美国FEI公司），KQ-500B型 超声波清洗器（昆山市超声仪器系统有限公司），HH-2型数 显恒温水浴锅（国华电器有限公司），ZYQ-211型恒温振荡器 （黑龙江东拓仪器制造有限公司），DMM-90904电热恒温鼓风 干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。 胡黄连昔II对照品（98%,,购自江苏泽朗医 药科技有限公司；丙烯酰胺（AM）,均为分析纯，购自国药 集团化学试剂有限公司；1-乙烯基咪哇（1-Vinyl）和乙二 醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)均为分析纯，购于日本东京化成 工业株式会社(TCI)；偶氮二异丁騰(AIBN)化学纯，购自 上海试四赫维生化有限公司；乙騰为色谱纯，甲醇、冰醋酸 及其他试剂均为分析纯，均购自上海星可生化有限公司。 2方法与结果 2. 1功能单体的选择 称取胡黄连昔II对照品，溶于50% 乙月青中，配成1.95X10-2 mmol?L-1的溶液；再取适量的 功能单体(1-Vinyl)于量瓶中，加入乙睛溶解，配成 5. 85X10-2 mmol?L-1的溶液。按照胡黄连昔II与功能单体 的摩尔比为1 ： 1?1 ： 6的顺序，逐次向胡黄连昔II标准液 中加入功能单体溶液，并测定其紫外光谱的变化，见图1。 胡黄连昔II溶于50%乙睛后，在200, 220, 260 nm处有 吸收峰，但随着功能单体的加入，只有200, 220 nm处的吸 收峰有变化。随着AM的加入，200, 220 nm处的吸收峰都发 生了明显蓝移，加入1-Vinyl 3 nm,效果更好，符合功能单 体选择标准，故本实验选择1-Vinyl作为胡黄连昔II的功 能单体。 2.2 MIPs的制备 胡黄连昔II、功能单体1-Vinyl.交 联剂EDMA以1 ： 5 ： 12的摩尔比例加入盛有150 mL 90%甲醇 的圆底烧瓶中，超声溶解；加入引发剂AIBNIOmg,溶解后, 通氮气15 min,密封，60 ￡水浴聚合24 h；反应合成的聚 合物经干燥后，用甲醇-冰醋酸(9：1)以索氏提取的方 式进行洗脱，洗去模板分子以及未聚合的功能单体和交联 剂，直至紫外检测无以上物质的紫外吸收；再用甲醇洗去残 留的冰醋酸，即得到胡黄连昔II的分子印迹聚合物，经60 °C 真空干燥，备用。空白印迹聚合物（NIPs）的合成除了不加 模板分子胡黄连昔II外，其余步骤同于MIPs的制备[3-4] o 2. 3形貌表征取适量胡黄连昔IlMIPs于扫描电子显微 镜下观测拍照，外形和大小符合标准，见图2O从图中