实验三 细胞基本功能课件.ppt

实验三 细胞基本功能 目的 脑脊髓 神经肌肉标本 神经标本 绝对不应期 相对不应期 单相动作电位 双相动作电位 坐骨神经兴奋的传导速度 蟾蜍 原理 为什么选择两栖类的离体组织器官作为实验标本？ 如何测定单向、双向动作电位？ 如何测定绝对不应期和相对不应期？ 原理 在有效刺激作用下(常用电刺激)，神经纤维膜内外产生去极化，当其极化达到阈电位时，能诱发膜产生一次在神经纤维上可传导的快速电位反转，此即为动作电位(AP)。神经干动作电位是神经兴奋的客观标志，处于兴奋状态的部位对静止部位而言，膜外电位呈负电性质，当神经冲动通过以后，膜外电位又恢复到静止时水平。 原理 动作电位在神经干上传导有一定的速度。不同类型的神经传导速度不同，神经纤维越粗则传导速度越快。 测定神经冲动在神经干上传导的距离与通过这段距离所需的时间，可根据距离(s)、时间(t)、速度(v)的关系求出神经冲动的传导速度，即v=s/t。 原理 神经干由许多神经纤维组成，故神经干动作电位与单根神经纤维的动作电位不同，它是由许多神经纤维动作电位综合成的综合性电位变化。所以神经干动作电位幅度在一定范围内可随刺激强度的变化而变化。 原理 刺激器输出两个电脉冲，通过调节两刺激脉冲间隔，可测得坐骨神经的绝对不应期和相对不应期。 将两刺激脉冲间隔由最小逐渐增大时，开始只有第一个刺激脉冲产生AP，第二个刺激脉冲不产生AP，当两刺激脉冲间隔达到一定值时，此时第二个刺激脉冲刚好能引起一极小的AP，这时两刺激脉冲间隔即为绝对不应期。 继续增大刺激脉冲间隔，这时由第二个刺激脉冲产生的AP逐渐增大，当两刺激间隔达到某一值时，此时由第二个刺激脉冲产生的AP，其大小刚好和由第一个刺激产生的AP相同，这时两刺激脉冲间隔即为相对不应期。 继续增大刺激间隔，此时由两刺激脉冲产生的AP将始终保持完全一致。 材料及设备 蟾蜍 常用手术器械 任氏液锌铜弓 培养皿 烧杯 Medlab生物信号采集系统 神经标本屏蔽盒 蛙板等。 神经肌肉标本 不应期的测定（采用“自动间隔调节”的刺激方式） 阈强度和顶强度（采用“自动幅度调节”的刺激方式） 神经干标本 双相动作电位的测定 神经干倒转后，AP的变化 传导速度的测定 生物电现象的观察 单向动作电位的测定 蟾蜍 方法及步骤 一、坐骨神经腓肠肌标本的制备 毁脑脊髓 去躯干上部及内脏和皮肤：在荐尾关节前1cm处用剪刀剪断脊柱，将前半躯干、皮肤和内脏一并拉剥弃之，仅保留一段腰背部脊柱及两后肢，并将其放入盛有任氏液的培养皿中。 洗净手和所用过的用具，以防沾染标本。 平分标本：沿脊柱正中线至耻骨联合中央将标本分为两半。放入任氏液中。 图 蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备甲、毁脑脊髓 乙、丙 剪除躯干前段及内脏 丁、去皮肤 方法及步骤 游离坐骨神经：任取一标本，用玻璃分针游离坐骨神经腹腔段。然后换至背侧向上，持玻璃分针沿坐骨神经沟（股二头肌及半膜肌肌间沟）小心分离坐骨神经大腿段，用剪刀剪去神经干上各细小分支（切忌撕扯），将坐骨神经中枢端连带一小块椎骨剪下，游离坐骨神经至膝关节处。 分离股骨头：沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，将股骨刮净，保留膝关节端股骨1cm，剪去其余部分。 分离腓肠肌：在腓肠肌跟腱下穿线、结扎。提起结扎线，在结扎线下端剪断跟腱。用玻璃分针游离腓肠肌至膝关节处，剪去以下部位。制成坐骨神经-腓肠肌标本。 检验标本：用沾有任氏液的锌铜弓轻触一下坐骨神经，如腓肠肌发生迅速而明显的收缩，说明标本的兴奋性良好。将标本浸入任氏液中15分钟，以稳定其兴奋性。 1、股三头肌 2、股二头肌 3、半膜肌 4、股骨 二、生物电现象的观察 将一个神经肌肉标本的神经的一点轻置于臀部肌肉的损伤部，另一点置于正常部，观察在接触时是否引起肌肉的收缩? 将甲标本的神经放在乙标本的肌肉上，再用锌铜弓刺激乙标本的神经，观察是否引起甲标本的肌肉收缩。 三、蛙坐骨神经干标本制备 标本制备方法基本同坐骨神经—腓肠肌标本制备法，只是为了获得尽量长的神经干标本，在分离到腓肠肌后再继续沿神经一分支(胫神经)一直分离至踝关节附近，剪断。 四、仪器联接和调试 打开Medlab生物信号采集系统软件，任选二个通道（Medlab-U）和2，4通道(Medlab-E)作为记录信号的通道或用于刺激信号的监视通道（不应期测定，Medlab-U应用Q9三通将刺激输出分成两路，一路用于刺激标本，一路输入4通道，Medlab-E则应按下CH4上方的R-S键） 并用高阻抗导线将通道输入口与神经屏蔽盒的引导电极相连，用刺激导线将Medlab的刺激信号输出口与神经屏蔽盒的刺激电极相连。 将神经屏蔽盒内所有电极用浸有任氏液的棉球擦净。用镊子夹住已制备好的神