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实验九 人ABO血型鉴定 一、 目的要求 1、 学习鉴定血型的方法。 2、 观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理。 二、 基本原理 血型是指血细胞膜上特异抗原的类型。在人ABO血型系统中，红细胞膜上有A、B两种凝 集原，英血清中存在能与红细胞膜上的凝集原发生反应的两种凝集素（抗体），即抗B凝集 素和抗A凝集素。根据红细胞膜上有无A、B凝集原而将人的血型分为A、B、0、AB四 种基本类型：红细胞膜上只有A凝集原者为A型血，其血浆中有抗B凝集素；红细胞膜上 只有B凝集原者为B型血，其血浆屮有抗A凝集素；红细胞膜上既没有A凝集原又没有B 凝集原者为0型血，其血浆中有抗A和抗B两种凝集素；红细胞膜上既有A凝集原又有B 凝集原者为AB型血，其血浆屮既没有抗A凝集素也没有抗B凝集素。若将含A凝集原的 红细胞与含抗A凝集素的血浆（或血清）混合，就会出现红细胞聚集成簇，这种现象称为 红细胞的凝集反应（实质是抗原■抗体反应）。血型鉴定的方法就是根据这一原理设计的，将 受试者的血液（主要是红细胞）分别加入标准A型血清（含抗B凝集素）和标准B型血清 （含A凝集素）中，观察有无红细胞凝集现象发生，从而判断受试者的血型。 三、材料与器械 显微镜、离心机、采血针、玻片、滴管、1ml吸管、小试管、试管架、牙签、标准A型和B 型血清、生理盐水、75%酒精、棉球、消毒棉签。 四、实验步骤 1、玻片法 75%酒精棉球消毒耳垂或指端，待酒精挥发干后，以刺血针刺破皮肤，滴1~2滴血于盛有 lml生理盐水的小试管屮混匀,两端作好标记（A、B或抗A、制成红细胞悬液。取洁净玻片一块，用蜡笔在玻片背面左右 抗B）。将标准的A型（抗B）和B型（抗A）血清分别滴 在玻片左右两端。用滴管吸取红细胞悬液分别滴在玻片左右两端。用滴管吸取红细胞悬液分 别滴 lml生理盐水的小试管屮混匀, 两端作好标记（A、B或抗A、 2、试管法 取小试管2只，分别标明A、B,再加入A型或B型标准血清与受度者红细胞悬液各1滴, 混匀后立即离心（lOOOr/min） Imin,取出后用手指轻弹试管底，使沉淀物被弹起，在良好 的光源下观察。若沉淀物成团漂起，表示发生凝集现象；若沉淀物边缘呈烟雾状逐渐上升, 最后使试管内液恢复红细胞悬液状态，表示无凝集现象。 五、 注意事项 1、 试管法较玻片法结果准确。 2、 肉眼看不清凝集现象时，应在低倍显微镜下观察。 3、 红细胞悬液和血清应新鲜，因污染可产生假凝集现象。 4、 凝集反应的强度因受检者抗体效价而异。在肉眼看不到凝集现象是否发生时，应在显微 镜下观察并加以核实、 5、 注意是否有溶血现象，切勿把溶血当作不凝集（此处溶血和凝集均提示配血不和）。 6、 判断红细胞凝集，要有足够的时间。如室温过低，可延长观察时间，或将载玻片保持载 37°C培养箱中。 7、 注意区分红细胞的叠连和凝集现象。前者经滴加1?2滴生理盐水并混匀后，现象消失, 而后者则不消失。 8、 在操作中，应严格分离各种检测用品，注意吸取标准血清的滴管和搅拌用的竹签等用品 绝对不能混用；用玻棒蘸血时，也都是只蘸一次，避免交叉污染。 9、 玻棒蘸血切勿过多或过少，以免影响判断结果。 六、 思考题 1、 己知某人为A型（或B型）血，在无标准血清的情况下，可否对其他人进行ABO血型 鉴定？如何进行？ 答：行.可将已知血型的血液分离11!红细胞和血清，再与未知血型的红细胞和血清进行交叉 配血实验，根据交叉配血的结果得到未知血型的肝细胞抗原肝细胞抗原和血清凝集素，即可 判定。 2、 同型血相输时，是否需要做交叉配血试验？为什么？ 也要做交叉配血试验。即使在ABO系统血型相同的人Z间进行输血，在输血前必须进 行交叉配血试验（corss-matchtest）,即不仅把供血者的纸细胞与受血者的血清进行血清配合 试验（这称为试验主侧）；而且要把受血者的红细胞与供血者的血清作配合试验（这称为试 验的次侧）。这样，既可检验血型测定是否有误，又能发现他们的红细胞或血清中，是否还 存在一些其它的凝集原或凝集素，足以引起红细胞凝集反应。在进行并叉式配血试验时，应 在37°C下进行，以保证可能有的凝集反应得以充分显示。 不同血型的人是不能相互输血的，AB血型的人并不是万能受血者。AB血型人的血清 屮虽不含有抗A抗B抗体，但其红细胞内含A.B .抗原。如果输用英他血型血时，极易引起 输血反应。所以，AB血型不能接受其他血型的血液。 以往曾经把O型的人称为“万能供血者（universal donor） ,认为他们的血液可以输给其 他血液的人。但目前认为这种输血是不足取的，因为，虽然O型的红细胞上没有A和B凝 集原，因而不会被受血者的血浆凝集，然而O型人的血浆屮的抗A和抗B凝集素能与其它 血型受血者的红细胞发生凝集反应。当输入