掌叶半夏矾制前后致炎毒性比较探究.docxVIP

掌叶半夏(虎掌南星)矶制前后致炎毒性比 较探究 ［摘要］目的：探索掌叶半夏致炎毒性及白矶炮制对 其致炎作用的影响。方法：自掌叶半夏鲜品中分离毒针晶及 掌叶半夏凝集素蛋白；采用整体动物及细胞水平模型，以炎 症介质为指标，考察掌叶半夏毒性成分毒针晶和凝集素蛋白 的致炎效应，及矶制对致炎作用的影响。结果：腹腔注射掌 叶半夏毒针晶混悬液可使小鼠腹腔渗出液中炎症介质PGE2, NO含量显著增加，矶制后生品及毒针晶诱导的PGE2, NO释 放显著下降；掌叶半夏凝集素蛋白刺激小鼠巨噬细胞后，在 一定时间内可导致剂量依赖性的炎症因子TNF- a及IL-6含 量显著增加。矶制后凝集素蛋白诱导的小鼠腹腔渗出液中 PGE2含量显著下降。结论：掌叶半夏的刺激性毒性在机体表 现为炎症反应，其所含的毒针晶及凝集素蛋白是其毒性成 分，均可导致显著的炎症介质释放。矶制可显著降低掌叶半 夏毒性成分的致炎毒性。 ［关键词］掌叶半夏；毒针晶；凝集素蛋白；致炎作用; 白矶炮制 ［收稿日期］2013-03-23 ［基金项目］国家自然科学基金项目(；教育部博士点教师基金项目(20113237120010)； 南京中医药大学中药学江苏省优势学科开放课题项目 (2011ZYX2-012) ［通信作者］吴皓，博士生导师，Tel: (025) E-mail： whao5795@vip. sina. com ［作者简介］郁红礼，助理研究员，研究方向为中药炮 制学，Tel: (025) E-ma订：yuhongli76@126. com 掌叶半夏，又名虎掌南星或简称为虎掌，为天南星科植 物掌叶半夏的Pineilia pedatiecta Schott.的干燥块茎， 辛、温，有毒，始载于《神农本草经》［1］,具有燥湿化痰、 祛风定惊、消肿散结之功效，市场上多作为天南星的代用品 广泛流通。文献显示，天南星科有毒中药以掌叶半夏的毒性 最强，其毒性主要表现对口腔、咽喉等的强烈刺激［2］,临 床大多使用炮制品。课题组前期研究表明，掌叶半夏的毒性 成分为毒针晶，块茎中含大量细长、质地柔韧、两端尖而锋 利的针状样晶体，可刺入机体组织引起刺激疼痛感：2-4］ o 毒针晶可引起家兔眼结膜强烈水肿［2］。毒针晶主要由草酸 钙、蛋白组成［5］。在掌叶半夏毒针晶蛋白中可检测到掌叶 半夏凝集素蛋白(P. pedatiecta agglutinin, PPA) ［6］, PPA可诱导大鼠中性粒细胞的迁移作用［7］,研究显示掌叶半 夏的刺激性毒性可能与诱发炎症相关。为进一步研究掌叶半 夏毒针晶及凝集素蛋白诱发炎症毒性的作用及白矶炮制对 致炎毒性的影响，本实验采用整体及细胞模型，以炎症介质 为指标，研究掌叶半夏毒性成分毒针晶及凝集素蛋白矶制前 后致炎毒性的变化，为天南星有毒中药的炮制机制的阐释、 炮制方法的改进创新及临床安全应用提供理论依据。 1材料 AKTA Purifier 蛋 白液相 色谱纯化系统（Amer sham Biosciences,美国GE公司）；冷冻干燥机（美国Labconco 公司）；SP-754PC型紫外-可见分光光度计（上海光谱仪器有 限公司）；SPECTRA MAX 190酶标仪（美国AD公司）；苯基琼 脂糖凝胶柱 HiPrepTM Phenyl FF （High sub） （16/10, 20 mL, 美国GE公司）；强阴离子型离子交换柱HitrapTMQFF（5mL, 美国GE公司）；凝胶过滤色谱柱HitrapTM Desalting （5 mL, 美国GE公司）;透析袋（截油相对分子质量7 000,BI0SHARP）o 凯基Braford蛋白含量检测试剂盒（南京凯基生物科技 发展有限公司，批； 一氧化氮测试盒（南京建 成生物工程研究所,批； Mouse IL-6 ELISA试 剂盒 （eBioscience,批号 E09358-1634）； Mouse TNF-a ELISA 试剂盒（eBioscience,批号 E09479-1638）；生理盐 水（南京小营药业集团，批号2010031702）；甲醇（色谱纯, 国药集团化学试剂有限公司，批号；其他试剂均 为分析纯；所有溶液均用去离子水配制。掌叶半夏鲜品购自 河北安国中药材种植基地，经南京中医药大学王春根教授鉴 定为天南星科植物掌叶半夏P. pedatiecta的块茎。 ICR小鼠，雄性，体重18-20 g,由上海斯莱克动物有 限责任公司提供，合格证号［SCXK (沪)2007-0005］ o 2方法 2. 1样品制备 掌叶半夏毒针晶的提取分离［6］：掌叶半夏鲜品去皮后 搅碎，加入有机溶剂少