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保健食品中免疫球蛋白IgG的测定
Determination of immunoglobulin content in health food
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适用范围
本方法规定了初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定。
本方法适用于初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定。
本方法最小检出量：2.0μg。
本方法最小检出浓度：当取样量0.1g，稀释至25mL，进样量20μL时，最小检出浓度为0.5mg/mL。
本方法最佳线性范围：0.2~1.0mg/mL。
2 方法原理
根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接，在pH2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。
3 试剂
3.1 pH6.5 0.05mol/L 磷酸盐缓冲液 ·········A液
3.2 pH2.5 0.05mol/L 甘氨酸盐酸缓冲液········B液
3.3 IgG标准贮备液：称取IgG标准品（Sigma化学公司）0.0100g,用pH6.5 0.05mol/L磷酸盐缓冲液溶解并定容至10.0mL,摇匀，浓度为1.0mg/mL。
3.4 IgG标准系列溶液：以IgG标准贮备液，用pH6.5 0.05mol/L磷酸盐缓冲液稀释成含IgG 0.2mg/mL, 0.4mg/mL, 0.6mg/mL, 0.8mg/mL, 1.0mg/mL的标准系列。临用时配制。
4 仪器和设备
HPLC仪具紫外检测器和梯度洗脱装置。
5 分析步骤
5.1 试样处理：称取0.1g（精确至0.001g）试样，用A液稀释至25.0mL,摇匀，通过0.45μm微孔滤膜后进样。
5.2.1 先用5倍柱体积的重蒸水洗柱，再用10倍柱体积的A液平衡柱，进样，按洗脱程序进行洗脱。
5.2.2 HPLC参考条件
色谱柱：Pharmacia HI-Trap Protein G柱，1mL。
波长：280nm
移动相： A液
B液 进行梯度洗脱，见下表。
梯度洗脱表：
Time
Flow mL/min
A%
B%
Gradient
0
0.4
100
0
※
4.5
0.4
100
0
6
5.5
0.4
0
100
6
15.0
0.4
0
100
6
15.5
0.4
100
0
6
22.0
0.4
100
0
6
6 分析结果表示
6.1 计算
式中 x：试样中IgG的含量，g/100g；
m：试样的质量，g；
C：被测液中IgG的含量，mg/mL；
V：试样定容的体积，mL。
6.2 结果表示：计算结果保留三位有效数字。
技术参数
允许差:≤5%
回收率:94.4~95.1%
色谱图
IgG峰IgG峰
IgG峰
IgG峰
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