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P/ACE MDQ 毛细管电泳原理和技术简介 分离/分析工具回顾 ~1950 PC ~1960 TLC ~1970 GC ~1980 HPLC , Gel Electrophoresis ~2000 CE ?2010 Chip? 毛细管电泳与其它分析仪器的比较 毛细管电泳： 指一系列以内径10-200um的毛细管柱为分离通道，以高压直流电为分离动力对大分子和小分子等进行高效分离和检测的有关技术的统称。 毛细管电泳原理示意图 P/ACE MDQ 的示意图 进样方式 毛细管电泳的检测手段 ?二极管阵列检测 (UV/VIS DAD) ?激光诱导荧光检测 (LIF) ?间接检测 (Indirect Detection) ?电化学检测 ?质谱检测 (CE-MS/MS) ?化学发光检测 紫外检测光路图 二极管阵列检测器 激光诱导荧光检测器 间接紫外检测 毛细管电泳的主要模式 毛细管区带电泳（CZE） 毛细管凝胶电泳（CGE） 毛细管等电聚焦（CIEF） 毛细管电动色谱（EKC） 毛细管胶束电动色谱（MECC） 毛细管电色谱（CEC） 毛细管等速电泳（ITP） 亲和毛细管电泳（ACE） 非水相毛细管电泳（NACE） 毛细管区带电泳（CZE） 分离原理 样品在电解液中泳动,根据物质的荷/质比 （charge/mass比值）差异来进行分离，比值愈大,跑得愈快。 -- 特点 1.可使用凃层(coating-避免样品吸附或抑制电渗透流)或未凃层(uncoating)的毛细管。 2.毛细管中除电解质外,无需填充任何物质。 3.使用未凃层的毛细管进行分离时,不仅是正电荷，包括无电荷及负电荷物质都會向负电极移动(因为电渗流),所以可同时检测正电荷、负电荷及中性物质。 4.以电解质之pH值、离子浓度、温度、毛细管电泳及电压大小来控制分离状态。 -- 主要应用 蛋白质、多肽及帶电荷的大小分子 可取代传统电泳及离子交换HPLC。 毛细管凝胶电泳分离原理 毛細管內先填充凝胶(例如polyacrylamide或cellulose),此时凝胶会在毛細管內形成分子筛,样品依分子量的大小在毛細管內移动速度不同而进行分离 -- 特点 1.可分离蛋白质、DNA、RNA、多糖类及高分子聚合物,並确定其分子量。 2.可改变Gel的浓度來控制分离的范围。 -- 主要应用 蛋白質、DNA、RNA、多糖类及高分子聚合物。 可取代凝胶电泳,SDS及GPC。 化学胶 ?交联或化学键合到毛细管壁 ?网状结构稳定 ?聚合后网孔大小固定 ?对热敏感 ?颗粒会损坏结构 ?具有较高的分辨率 ?不可替换,粘度较高 物理胶 ?没有交联或吸附到毛细管壁 ?线性或分枝的网状聚合物 ?动态网状结构 ?网孔大小不固定 ?对热不敏感 毛细管胶束电动色谱 分离原理 -- 电解质中加入表面活性剂(surfactant,例如SDS)，使之形成胶束（Micelle），样品根据其疏水性(Hydrophobicity)强弱的差异，在胶束与电解质的分配系数有所不同,來进行分离 ，样品疏水性愈強,则进入胶束的机会愈大.通常物质进入胶束后,泳动的速度会变慢,因此疏水性愈強的物質則愈慢出來。 -- 特点 1.根据分子之疏水性及亲水性的強弱差异进行分离 2.可分离不帶电荷之物质,疏水性強的物质或电荷/质量比值相近之物质 -- 主要应用 药物分析、环境污染物分析及其他小分子物质 -- 可取代反相HPLC 毛细管电泳应用与不同模式的选择 毛细管电泳与HPLC的比较 相同之处： 1. 快速高效分离技术 2. 可定量 3. 全自动化 4. 可用不同模式 5. 在许多领域逐步取代HPLC 不同之处 毛细管电泳 HPLC 1.根据 电泳淌度差异 保留时间差异 2.分离效率（N） 与扩散系数D成反比 与扩散系数D成正比 3.样品量 纳升级 微升级 4.检测 在线检测 柱后检测 5.制备量 微量制备 常量制备 毛细管电泳与色谱层流的比较 毛细管电泳与HPLC的互补结合应用 逐步代替许多HPLC 的功能—— 手性拆分、蛋白质分析、碱性药物、 DNA分析、毛细管电泳中药指纹图谱、 药物的质量控制、杂质测定 在制备功能上是互补的： HPLC 强调较大的制备量 CE 强调可获得极高的纯度 毛细管电泳的主要优点 高灵敏度 picomole (UV) /fetomole (LIF) 高分离效率 （比HPLC 高得多:àí??°?êy?ú