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微生物实验室培养与应用 二、无菌技术 1、获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下： （1）．对实验操作的 、操作者的 和 进行 。 （2）．将用于微生物培养的 、 和 等器具进行。 （3）．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。 （4）．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。 2、消毒和灭菌 （1）．消毒是指 。常用的方法有 、 、 消毒法。 （2）．灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于那些用具？ 三、实验操作----大肠杆菌的纯化培养： 1.本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和 两个阶段进行。 2.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是： 、 、 、 、 。 3． 倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是： ①在火焰旁右手拿 ，左手 ； ②使锥形瓶的瓶口 ； ③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板 。 四、纯化大肠杆菌 1.微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有 和 等。 2．平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。 3.其操作步骤是： ① 在酒精灯火焰上灼烧直至 。 ②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。 ③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。 ④将冷却的接种环伸入到 。 ⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。 ⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。 ⑦灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。 ⑧将平板 培养。 4．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度 ，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的 。 系列稀释操作： ①取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。 ②用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。 ③从10倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推 〖问题1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ 〖问题2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？ 〖问题3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？ 〖问题4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止 〖问题5〗在制备牛肉膏