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高中生物选修 3 基础知识总结 专题一 基因工程 原理： 基因重组 基因工程的概念：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过 体外 DNA重组和转基因技术， 赋予生物 以新的遗传特性 ，创造出 更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 。基因工程是在 DNA分子水平 上进行 设计和施工的，又叫做 DNA重组技术 。 定向改造生物的遗传性状。 （一）基因工程的基本工具 “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶） （ 1）来源：主要是从 原核生物 中分离纯化出来的。 （ 2）功能：能够识别双链 DNA分子的某种 特定 的核苷酸序列（回文序列），并且使每一条链中 特定部位的两个核 苷酸之间的 磷酸二酯键 断开，因此具有 专一 性。（注意“酯”的写法） （ 3）结果：经限制酶切割产生的 DNA片段末端通常有两种形式： 黏性末端 和平末端 。 “分子缝合针”—— DNA连接酶 两种 DNA连接酶（ E· coliDNA 连接酶和 T4DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别： E· coliDNA 连接酶来源于 大肠杆菌 ，只能将双链 DNA片段互补的 黏性末端 之间的磷酸二酯键连接起来；而 T4DNA连接酶来源于 T4 噬菌体 ，能缝合 两种末端 ，但连接平末端的之间的效率较 低。 (2)DNA 聚合酶、 RNA聚合酶和 DNA连接酶的比较：  基因工程的别名 基因拼接技术或 DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→ 拼接→导入→ 表达 实质 基因重组 结果 人类需要的基因产物（定向的 ) 3. “分子运输车”—— 载体 （ 1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源 DNA 片段插入。③具有标记基因，供重组 DNA的鉴定和选择。 ④安全无毒 ⑤大小合适 2）最常用的载体是质粒 , 它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环 DNA分子。 3）其它载体： λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 ( 二 ) 基因工程的基本操作程序 第一步： 目的基因的获取 1. 目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因或具有调控作用的因子。 2. 目的基因的获取有三种方法： 从基因文库中获取； PCR扩增目的基因；人工化学法合成。 原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法 3.PCR 技术扩增目的基因 1）原理： DNA复制 2）过程：第一步：加热至 90～ 95℃ DNA解链；第二步：冷却到 55～ 60℃， 引物结合到互补 DNA链；第三步：加 热至 70～ 75℃， 热稳定 DNA聚合酶（ Taq 酶）从引物起始互补链的合成 。 3）条件： 模板、耐高温的 DNA聚合酶（ Taq 酶）、引物、脱氧核苷酸、精确的温度控制、能量第二步： 基因表达载体的构建 1. 目的：使目的基因在受体细胞中 稳定存在 并且可以 遗传至下一代 ，使目的基因能够 表达和发挥作用 。 组成： 目的基因 ＋启动子 ＋终止子 ＋标记基因（﹢复制原点） （ 1）启动子：启动目的基因的转录。是一段有特殊结构的 DNA片段 ，位于基因的 首端 ，是 RNA聚合酶 识别和结合 的部位，能驱动基因 转录出 mRNA，最终获得所需的蛋白质。 （ 2）终止子：终止目的基因的转录。也是一段有特殊结构的 DNA片段 ，位于基因的 尾端 。 - 1 - 3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是 抗生素基因 。 第三步： 将目的基因导入受体细胞 _ 转化的概念： 是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 常用的转化方法： 将目的基因导入 植物细胞 ：采用最多的方法是 农杆菌转化法 ，其次还有 基因枪法 、花粉管通道法 。 将目的基因导入 动物细胞 ：最常用的方法是 显微注射技术 。此方法的受体细胞多是 受精卵 。 将目的基因导入 微生物细胞 ：Ca2+转化法 注意： ① 将目的基因导入受体细胞，目前已开发出来的方法有很多种，每种方法都有利弊，适合于不同的受体细胞。究竟选用哪种方法，要根据具体情况而定。 ② 以上介绍的几种方法，在导入受体细胞之前，都必须进行目的基因表达载体的构建，也就是说导入受体细胞的必须是重组 DNA分子，而不能直接导入目的基因。 第四步： 目的基因的检测和表达 首先要检测 转基因生物的染色体 DNA上是否插入了目的基因 ，方法是采用 DNA分子杂交技术 。 2. 其次还要检测 目的基因是否转录出了 mRNA，方法是采用 用标记的目