端粒与端粒酶2.pptVIP

五、端粒与端粒酶的研究现状 2 、非核苷类小分子抑制剂 这类小分子主要是与端粒酶的催化亚基端 粒酶逆转录酶 TERT 相互作用，如 MKT077 和 BIBR1532 。 —— 端粒 与 端粒酶 主讲人：杨长友 重庆师范大学生命科学学院 生物化学与分子生物学专业 长寿梦想的 “天梯” 2009 年诺贝尔生理学或医学奖 贡献：揭示了 “ how chromosomes are protected by telomeres and the enzyme telomerase ” ( 染色体是如 何被端粒和端粒酶保护的 ) 。 Elizabeth H. Blackburn 伊丽莎白 · 布莱克本 Carol W. Greider 卡罗尔 · 格雷德 美国巴尔的摩约 翰 · 霍普金斯医学院 Jack W. Szostak 杰克 · 绍斯塔克 美国哈佛医学院 美国加利福尼亚 旧金山大学 主要内容 ? 端粒与端粒酶的发现 ? 端粒的结构与功能 ? 端粒酶的结构与功能 ? 端粒及端粒酶与衰老、癌症的关系 ? 端粒与端粒酶的研究现状 ? 影响端粒长度的因素 一、端粒与端粒酶的发现 ? 端粒最早是由著名的遗传学家 赫尔曼 · 缪勒 （ Hermann Muller ，因为发明用 X 射线突变基因而 获得 1946 年的诺贝尔生理或医学奖）于 1938 年 发现 的。 ? 缪勒给这种天然末端结构取了个形象的名字 —— telomere ， 这是由希腊语“ telos” ( 末端 ) 及“ meros” ( 部分 ) 组成的。中文翻译为“ 末端的颗粒” ， 简称 “ 端粒” 。 ? 1941 年芭芭拉 · 麦克林托克 （ Barbara McClintock ， 因为发现玉米的转座子获得 1983 年诺贝尔生理或医 学奖 ）在玉米的遗传学研究中也证实端粒的存在。 端粒的位置 一、端粒与端粒酶的发现 ? 1978 年伊丽莎白 通过体外 DNA 复制实验，推断出模 式生物四膜虫（ Tetrahymena thermophila ）的端粒中 含有许多重复的 5 - CCCCAA- 3 六碱基序列， 首次 阐明了四膜虫的端粒结构。 同时，杰克 · 绍斯塔克正 试图在酵母中建构 人工线性染色体 ，希望它能够像自 然染色体一样在细胞中复制。但他构建的人工染色体 转化入细胞后总是很快降解。 ? 1980 年，当伊丽莎白报道她关于端粒 DNA 的发现时， 引起了杰克的极大兴趣。于是二人合作将新发现的四 膜虫端粒序列和人工染色体连接到一起，而后导入酵 母细胞。奇迹出现了，人工染色体不再降解，可以在 细胞内正常复制。这 一方面证实了端粒对染色体的保 护作用，也使 DNA 的大片段克隆成为可能，为后来 的人类基因组测序奠定了基础。 一、端粒与端粒酶的发现 ? 1984 年，伊丽莎白在试验中发现了一 个有趣的现象：不论是四膜虫还是酵 母自身的端粒序列都可以在酵母中被 保护和延伸。而带着四膜虫端粒 DNA 的人工染色体进入到酵母后，复制后 被加上的是酵母端粒序列而非四膜虫 的端粒序列。 一、端粒与端粒酶的发现 一、端粒与端粒酶的发现 ? 1984 年，卡罗尔作为博士研究生进入伊丽 莎白实验室， 开始了端粒末端合成机制的 研究工作。 ? 她们假设端粒是由某种酶合成 ， 那么在 细胞裂解液里应该有这种酶的存在， 如果 使用四膜虫细胞裂解液在体外能检测到端 粒序列的复制和延伸， 那无疑证实这种 “ 酶” 的存在。 一、端粒与端粒酶的发现 实验过程大致如下： 1 、将底物寡聚核苷酸（端粒 DNA 、随机序列 DNA ）进行放射性标记； 2 、将高浓度的寡聚核苷酸底物与高浓度的四 膜虫细胞裂解液一起孵育； 3 、通过放射性标记的核苷酸来检测体外端粒 序列的合成。 一、端粒与端粒酶的发现 ? 结果显示，当四膜虫细胞裂解液加入四膜虫或 酵母端粒序列 DNA 时，其明显被重新加上了 DNA 碱基，而且以 6 个碱基递增的方式延长， 与四膜虫端粒重复基本单位为 6 个碱基正好吻 合，而对于随机序列的 DNA 底物并不发生延伸。 ? 实验结果证明， 端粒 DNA 的延伸是通过“ 酶” 来完成的，且这种酶的活性不依赖于 DNA 模板。 这种酶后来被命名为“端粒酶” （ telomerase ）。 一、端粒与端粒酶的发现 ? 1985 年，卡罗尔和伊丽莎白在四膜虫细 胞核提取物中首先发现并纯化了端粒酶。 之后 ，耶鲁大学 Morin 于 1989 年在人宫 颈癌细胞中也发现了人体端粒酶。 二、端粒的结构与功能 ? 端粒 (telomere) 也称端区，是真核生物线性染色体的 天然两末端，呈膨大粒状， 由染色体末端 DNA 重复 片断（富含 G 、 C ）与蛋白质组成（