实验植物组织培养34页.pptVIP

对照 NaCl 冰水 实验六 一、 配制培养基 二、无菌操作 三、无菌培养 四、观察记录 ※ 上交实验报告时间： 第 16 周 实验安排 下周（第 11 周） 本周（第 10 周） 第 12 、 13 、 14 、 15 周每周进行观察 （ 1 ）深刻理解植物组织培养的基本概念 和理论依据。 （ 2 ）训练利用实验室的条件来合理设计 和完成实验的基本技能。 实验目的 植物组织培养就是将 植物离体的生活部分 （如 器官、组织、细胞甚至原生质体等）通过 无菌操作 接种在适宜的培养基上 ，在人工控制的条件（如温 度、光照、湿度等）下进行培养的技术。 理论依据 ：植物细胞的全能性。 植物体的每一个细胞都携带着一套完整的基因 组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 实验原理 外植体 接种 完整植株 脱分化 再分化 外植体 愈伤组织 芽、根 实验设计的依据 依据一 分化 植 物 组 织 培 养 的 过 程 接种 脱分化 再分化 愈伤组织 外植体 再分化 冲洗 表面消毒 培养基中植物生长物质的种类和浓度在脱分 化和再分化中起重要作用，尤其是生长素和细胞 分裂素类的比例。 实验设计的依据 依据二 生长素类 / 细胞分裂素类 高 诱导根的分化 中 愈伤组织生长不分化 低 诱导芽的分化 ① MS 培养基的大量元素； ② MS 培养基的微量元素； ③ MS 培养基的铁盐； ④有机附加成分； ⑤ NAA 、 6-BA ； ⑥蔗糖、冷凝脂； ⑦ 0.1mol/LNaOH 和 0.1mol/LHCl 。 条件一： 实验药品 实验条件 A 无机营养 ( 包括植物必需的大量和微量元素， 均 以盐的形式加入 ) B 碳源 ( 一般为蔗糖，浓度 30g/L 左右 ) ，作用是 提供营养 和 维持渗透平衡。 C 有机附加物 ( 主要有氨基酸、水解酪蛋白； VB 1 、 VB 6 、 烟酸（ VB 3 ）和肌醇，等 ) D 植物生长物质 ( 生长素类和细胞分裂素类等 ) 培 养 基 的 成 分 肌醇 ：有助于活性物质发挥作用，提高 VB1 的效果。 分子量较大和其他在一起不好溶解。单独配制。 氨基酸：有机氮源 有机物质： 提供必须的微量营养成分、生理活性物 质。 条件二： 实验仪器及设备 ①烧杯、移液器、量筒、精密电子天平、 三角瓶、 pH 试纸、封口膜等； ②高压灭菌锅； ③无菌操作间、超净工作台； ④能够控制光照和温度条件的培养室。 实验条件 要求 以菊花无菌苗为材料进行以下培养基的 设计。 （ 1 ）诱导菊花无菌苗叶片形成愈伤组织 （ 2 ）诱导菊花无菌苗茎段形成芽 实验设计 菊花无菌苗 实验材料 具体做法 全班分为成小组，根据设计要求结合实验原理、 设计依据及已提供的 实验条件，在 查阅资料的基础 上 ，合理设计实验（主要对培养基进行设计）。 设计出初步方案后，每组推选一名代表向全班 汇报设计的原理、 方案 和 预期的结果 ；再经全班讨 论确定最后的设计方案。 全班分成 6 个小组，按照要求经查阅资料、代表汇报和全班 讨论，最后确定设计的培养基如下（ MS 为基本培养基）： 1. 诱导菊花无菌苗叶片形成愈伤组织 （ 1 ） MS + 6-BA 0.2 + NAA 0 （ 6-BA 占优势 ） （ 2 ） MS + 6-BA 0.2 + NAA 0.15 （ NAA 增加浓度） （ 3 ） MS + 6-BA 0.2 + NAA 0.2 （二者比例适中） 2. 诱导菊花无菌苗茎段形成芽 （ 4 ） MS + 6-BA 0 + NAA 1.0 （ NAA 占优势） （ 5 ） MS + 6-BA 0.5 + NAA 1.0 （ 6-BA 增加浓度） （ 6 ） MS + 6-BA 1.5 + NAA 1.0 （ 6-BA 占优势） 根据设计的培养基，利用提供的实验条件，我们将按照下 列步骤完成实验。 接种 脱