中药益气化纤汤抗大鼠肺纤维化的实验研究.pdfVIP

DOC格式论文，方便您的复制修改删减 中药益气化纤汤抗大鼠肺纤维化的实验 研究 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：蔡望喜， 尹杉杉， 常建方 【摘要】 [目的] 观察益气化纤汤对肺纤维化模型大鼠肺泡巨噬 细胞(AM)和肺间质巨噬细胞(IM)中转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA 表达的影响。[方法]选用Wistar 大鼠96只，随机分为假手术组、模 型组、益气化纤汤组 (剂量为 4g·kg-1·d-1)、氢化可的松组(剂量为 20mg·kg-1·d-1);采用博莱霉素A5(剂量为6mg/kg)气管注入法复制肺 纤维化模型;分别于造模第 7、28 天分离培养AM、IM ，采用分子原 位杂交法(ISH)检测TGFβ1mRNA的表达。[结果]模型组AM、IM中 TGFβ1mRNA 表达阳性细胞百分率及积分光密度(D)值显著升高(均 P0.01);益气化纤汤可显著降低AM、IM中TGFβ1mRNA表达阳性细 胞百分率及D值(均P0.01),其作用与氢化可的松相仿。[结论]益气化 纤汤治疗肺纤维化的作用可能与其能降低TGFβ1的表达，抑制纤维 化的发展进程有关。 【关键词】益气化纤汤/药理学 肺纤维化/中药疗法 转化生长因子 DOC格式论文，方便您的复制修改删减 β 肺泡巨噬细胞/病理学 肺间质巨噬细胞/病理学 疾病模型 动物 大 鼠 肺纤维化进程中转化生长因子β1(TGF β1)的作用极为关键 。 TGF β1 是致纤维化关键性的细胞因子，它可以通过自分泌、旁分泌 等不同的方式，调节细胞增殖、分化、移行，促进成纤维细胞对胶原 蛋白、纤维连结蛋白、蛋白多糖等细胞外基质的合成和沉积，从而导 致脏器纤维化的形成[1]。益气化纤汤为我院治疗特发性肺纤维化的验 方。本实验依据病理进程，分别收集实验第 7 天肺泡巨噬细胞(AM)、 第 28 天肺间质巨噬细胞(IM)标本，采用分子原位杂交法(ISH)观察 不同时间点巨噬细胞中TGF β1 mRNA 的表达情况，探讨益气化纤汤 治疗肺纤维化的作用机制，现报道如下。 1 材料与方法 1.1 实验动物 雄性SPF 级Wistar 大鼠，体质量170 ～210g ， 由湖北省实验动物研究中心提供，合格证号为SCXK(鄂)2005 0005。 1.2 主要试剂与仪器 益气化纤汤(0.4g/mL) 由湖北省中医院药 剂科提供，批号注射用氢化可的松琥珀酸钠由天津市生 化制药厂生产，批号博莱霉素A5 为天津太河制药有限 公司产品，批号：050601;TGF β1 原位杂交试剂盒购自武汉 Boster 公 司 ，批 号 ： 060405; 寡 核 苷 酸 探 针 序 列 ： 5 ACCTGCAAGACTATCCACATGGAGCTGGTG 3 ， 5 TGTACAACAGCACCCGCGACCGGGTGGCCG 3 ， 5 GTACCAGAAATACAGCAACAA CCTGGCG 3 ;Ficoll 细胞分 DOC格式论文，方便您的复制修改删减 离液为美国GE 公司产品，批号：289124;胶原酶Ⅰ为美国Invitrogen 公 司产品，批号：124224l;DNA 酶由中国华美生物技术有限公司提供， 批号：2213123L。 1.3 动物造模[2]、分组及给药 大鼠用戊巴比妥钠(30mg/kg)腹 腔注射麻醉后固定于操作台上,颈部正中线切口，钝性分离暴露气管， 8 号头皮针从气管软骨环间隙刺入气管，将博莱霉素A5 (6mg/kg)注 入并使药物均匀分布在肺内，缝合肌肉、皮肤。假手术组除注入气管 的为生理盐水(NS)外，其他同手术造模法。将96 只大鼠随机分为4 组，假手术组、模型组、益气化纤汤组和氢化可的松组，每组24 只。 假手术组及模型组均灌胃给予生理盐水 10mL·kg-1·d-1;益气化纤汤