还原糖和总糖地测定3,5-二硝基水杨酸比色法.pdf

实用标准 还原糖和总糖的测定 3,5- 二硝基水杨酸比色法 一、目的 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使 用。 二、原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。 还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类， 单糖都是 还原糖， 双糖和多糖不一定是还原糖， 其中乳糖和麦芽糖是还原糖， 蔗糖和淀粉是非还原糖。 利用糖的溶解度不同， 可将植物样品中的单糖、 双糖和多糖分别提取出来， 对没有还原性的 双糖和多糖， 可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定， 再分别求出样品中还原糖 和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物， 3,5- 二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3- 氨基 -5- 硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系， 利用分光光度计， 在 540nm波长下测定光密度值， 查对标准曲线并计算， 便可求出样品中还 原糖和总糖的含量。 由于多糖水解为单糖时， 每断裂一个糖苷键需加入一分子水， 所以在计 算多糖含量时应乘以 0.9 。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1. 实验材料 小麦面粉；精密 pH 试纸。 2. 主要仪器 （1）具塞玻璃刻度试管： 20mL×11 文档大全 实用标准 （2 ）大离心管： 50mL×2 （3 ）烧杯： 100mL×1 （4 ）三角瓶： 100mL×1 （5 ）容量瓶： 100mL×3 （6 ）刻度吸管： 1mL×1；2mL×2；10mL×1 （7 ）恒温水浴锅 （8 ）沸水浴 （9 ）离心机 （10 ）扭力天平 （11 ）分光光度计 3. 试剂 （1）1mg/mL 葡萄糖标准液 准确称取 80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 100mg，置于小烧杯中， 加少量蒸馏水溶解后， 转移 到 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至 100mL，混匀， 4℃冰箱中保存备用。 （2 ）3,5- 二硝基水杨酸（ DNS）试剂 将 6.3gDNS 和 262mL 2M NaOH 溶液，加到 500mL含有 185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再 加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至 1000mL，贮于棕色瓶中备 用。 （3 ）碘 - 碘化钾溶液：称取 5g 碘和 10g 碘化钾，溶于 100mL蒸馏水中。 （4 ）酚酞指示剂：称取 0.1g 酚酞，溶于 250mL70%乙醇中。 （5 ）6M HCl 和 6M NaOH各 100mL。 四、操作步骤 1. 制作葡萄糖标准曲线 取 7 支 20mL 具塞刻度试管编号，按表 1 分别加入浓度为 1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水 和 3,5- 二硝基水杨酸（ DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。 文档大全 实用标准 表 1 葡萄糖标准曲线制作 2. 样品中还原糖和总糖的测定 （1）还原糖的提取 准确称取 3.00g 食用面粉，放入 100mL 烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入 50mL 蒸馏水，搅匀，置于 50℃恒温水浴中保温 20min ，使还原糖浸出。将浸出液（含沉淀）转移 到 50mL 离心管中，于 4000r/min 下离心 5min, 沉淀可用 20mL 蒸馏水洗一次，再离心，将 二次离心的上清液收集在 100mL容量瓶中， 用蒸馏水定容至刻度， 混匀，作为还原糖待测液。 （2 ）总糖的水解和提取 准确称取 1.00g 食用面