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糖尿病是一种常见多发的慢性代谢性疾病，最严重最常见的慢性并发 症是糖尿病 肾病，据资料表明，糖尿病 肾病的发病率在国内占糖尿病的 0.9%-36%[1]。 其早期 肾脏病理改变大多是可逆的，但终末期糖尿病肾病 的 5 年生存率小于 20%[7]。因此及 预防及诊治 DN 至关重要[2]。以往，对糖 尿病肾病早期诊断的常用指标有尿微量白蛋白、血清胱抑素 C、血清高敏 C 反应蛋白、NAG 、α 1-微球蛋白等，这些指标虽有助于 DN 的诊断，但缺乏特 异性和灵敏性。而早期肾小球微穿刺又因为操作复杂，过程痛苦等原因不易 被患者接受[8]。因此，寻找一种灵敏度高，特异性强的诊断指标迫在眉睫。本 文测定了 31 例糖尿病早期肾脏功能受损患者、33 例糖尿病非早期肾脏功能 受损患者和 25 例健康人血清抵抗素含量，现将结果报告如下： 一、 材料与方法 1.1标本来源 大连医科大学附属第一医院内分泌病房2型糖尿病患者血清，其中男30 例，女34例，年龄20～80岁，所有研究对象在取样前均排除大血管病变, 排 除患有急慢性感染、心功能不全、肝肾功能不全、原发性肾小球疾病及其他 自身免疫性疾病者, 排除使用胰岛素及胰岛素增敏剂者。各组对象的性别、 年龄等一般临床特征比较差异无统计学意义 （P0.05）。具有可比性。根据 AM/Cre将2型糖尿病患者分为2组，AM/Cre在30～300之间31例，男22例，女9 例。AM/Cre30 的患者33例，男13例，女30例。另设健康对照组25例，其中男 18例、女7例，均从大连医科大学附属第一医院健康体检人员中筛选，排除糖 1 尿病、高血压病、 肾病等其他相关疾病。血样要求:所有实验对象均在空腹 12h以上于清晨抽取肘静脉血2ml加于肝素抗凝管中，离心分离，取抗凝血清 置于-70°C低温冰箱中待测定抵抗素和血清胱抑素C。所有血样均来自大连 医科大学附属第一医院检验科。尿样要求：取晨尿10ml，3500r/ml，离心10min， 取上清液检测尿微量白蛋白（mALB）。 1.2主要试剂 1.2.1ELISA试剂盒： 北京奇松生物科技有限公司生产，批号为2011002B。 1．3主要仪器设备及耗材 （1）瑞士Tecan Sunrise酶标仪：早稻田(北京)生物科技发展有限公司上海 办生产。 （2）洗板机：早稻田(北京)生物科技发展有限公司上海办生产。 (3)高精度加样器及枪头：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul （4）37°C恒温箱 （5）BNⅡ免疫特种蛋白分析仪：上海SIEMENS公司生产。 （6）日立7600全自动生化分析仪：北京九强生物技术有限公司生产。 1.4试验方法 1.4.1ELISA法测血清抵抗素含量 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封 放回4°C。分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。将浓度依次为0 ng/ml，3 2 ng/ml ，6ng/ml，12 ng/ml，24ng/ml，48ng/ml，的标准品50ul分别加入标准孔， 将待测血清10ul分别加入待测样品孔， 再加样品稀释液40ul，空白孔不加。 除空白孔外，标准品和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测 抗体100ul，用封板膜封住反应孔，，37°C恒温箱温浴60分钟。弃去液体，吸 水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上排干，如此 重复洗板5次。依序每孔加入底物A 、B各50ml， 37°C避光孵育15min。依序每 孔加终止溶液50μ ，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。终止液的加 入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物 反应时间到后应尽快加入终止液。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光 密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 1.5高灵敏度的动态散射免疫比浊原理检测尿微量白蛋白 使用SIEMENS公司BNⅡ免疫特种蛋白分析仪分析测定，试剂采