第四章萃取分离法详解.ppt

2017/10/27 63 双水相萃取技术 (two-aqueous phase extraction) ，又称水溶液两相分配技术， 它利用不同的 高分子溶液 相互混合可产 生 两相或多相系统 ，静置平衡后，分成 互不相溶的两个水相，利用物质在互不相 溶的两水相间分配系数的差异来进行萃取 的方法，称为双水相萃取法。 特点 ：能保留产物的活性，操作可连续化， 可纯化蛋白质 2~5 倍。 2017/10/27 64 ① 系统含水量多达 75 % ～ 90 % , 两相界面张力极低 , 有助于 保持生物活性和强化相际间的质量传递 ② 分相时间短 ( 特别是聚合物 / 盐系统 ) , 自然分相时间一般 只有 5 ～ 15min 。 ③ 目标产物的分配系数一般大于 3 , 大多数情况下 , 目标产物 有较高的收率。 ④ 大量杂质能够与所有固体物质一起去掉 , 与其它常用固液分 离方法相比 , 双水相萃取技术可省去 1 ～ 2 个分离步骤 , 使整 个分离过程更经济。 ⑤ 设备投资费用少 , 操作简单 , 不存在有机溶剂残留问题。 双水相萃取技术的优点 2017/10/27 65 ? 最近，发现有一些高分子水溶液（如分子量从 几千到几万的聚乙二醇硫酸盐水溶液）可以分 为两个水相，蛋白质在两个水相中的溶解度有 很大的差别。故可以利用双水相萃取过程分离 蛋白质等溶于水的生物产品。例如用聚乙二醇 （ PEG Mr 为 6000 ） / 磷酸钾系统从大肠杆菌匀浆 中提取 β - 半乳糖苷酶。 ? 这是一个很有前途的新的分离方法，特别适用 于生物工程得出的产品的分离。双水相萃取在 生物分离过程中的应用，为蛋白质特别是胞内 蛋白质的分离和纯化开辟了新的途径。 2017/10/27 66 ? 双水相体系分类： ? 高聚物 / 高聚物双水相体系，高聚物 / 无机 盐双水相体系，低分子有机物 / 无机盐双水 相体系，表面活性剂双水相体系。 2017/10/27 67 一、双水相的形成 ? 熵增 —— 混合 —— 自发 ? 分子间作用力 ------ 随着 Mr 的增加 , 而增大 . ? 聚合物的不相溶性 ------ 含有聚合物分子的溶液发 生分相的现象 . ? 孤立系统总是趋向于熵增，最终达到熵的最大状 态，也就是系统的最混乱无序状态。但是，对开 放系统而言，由于它可以将内部能量交换产生的 熵增通过向环境释放热量的方式转移，所以开放 系统有可能趋向熵减而达到有序状态。 2017/10/27 68 如葡聚糖与聚乙二醇按一定比例与水混 合，静置平衡后，分成互不相溶的两个 水相，上相富含 PEG ，下相富含葡聚糖 2017/10/27 69 高聚物（ P ） 高聚物或低聚物（ Q ） 聚丙二醇 甲基聚丙二醇，聚乙二醇，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮， 羟丙基葡聚糖，葡聚糖 聚乙二醇 聚乙烯醇，葡聚糖，聚蔗糖 甲基纤维素 羟甲基葡聚糖，葡聚糖 乙基羟乙基纤维素 葡聚糖 羟丙基葡聚糖 葡聚糖 聚蔗糖 葡聚糖 聚乙二醇 硫酸镁，硫酸铵，硫酸钠，甲酸钠，酒石酸钾钠 2017/10/27 70 二、双水相萃取的基本概念 （一）相图 相图右上部为两相区，左下部为均相区，两相与均 相的分界线叫 双节线 。组成位于 A 点的系统实际上 由位于 C 、 B 两点的两相所组成， BC 称为 系线 。 当系线向下移动时， 长度逐渐减小，表明 两相的差别减小，当 达到 K 点时，两相间 差别消失， K 点称为 临界点 。 2017/10/27 71 （二）分配系数 ? 影响分配系数的因素包括很多，如 粒子大 小、疏水性、表面电荷、粒子或大分子的 构象 等，这些因素微小的变化可导致分配 系数较大的变化，因而双水相萃取有较好 的选择性。分配系数 K 与溶质的浓度和相 体积比无关： b t C C K ? 2017/10/27 72 三、影响双水相萃取的因素 （一）、成相高聚物的分子量 一般原则 : 对于给定的相系统，如果一种高聚 物被低分子量的同种高聚物所代替，被萃取 的大分子物质 , 如蛋白质、核酸、细胞粒子等， 将有利于在低分子量高聚物一侧分配。 如以 Dextran 500( MW 500 000) 代 替 Dextran 40 （ MW 40 000 ） , 即 增大下相高聚物的分子量，被萃取 的低分子量物质如细胞色素 C 分配 系数增加并不显著。然而，被萃取 的大分子量物质，如过氧化氢酶的 分配系数可增大到原来的 6~7 倍。 2017/10/27 73 （二）成相聚合物浓度 —— 界面张力 一般来说，双水相萃取时，如果相系统组成 位于临界点附近，则蛋白质等大分子的分配 系数接近于 1 。高聚物浓度增加