Intermedin通过抑制eNOS解偶联减少ROS产生保护内皮细胞的分子机制.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要III 常用缩写词中英文对照表VI 前 言1 1材料与方法3 1.1实验材料3 1.2 实验方法4 1.3 统计学方法8 2结 果9 2.1IMD 对eNOS解偶联的影响9 2.2IMD 对GTPCH-I表达的影响10 2.3IMD 对26S 蛋白酶体活性的影响11 2.4 IMD 对AMPK 活性的影响11 3 讨 论13 4结 论15 参考文献16 综 述19 致 谢28 个人简历30 山西医科大学硕士学位论文 Intermedin通过抑制eNOS解偶联减少ROS产生保护内皮细 胞的分子机制 摘 要 目的： Intermedin IMD （ ）是一种可以表达在肾脏内皮细胞中的生物活性肽，能通过抑 制氧化应激减轻肾间质纤维化，从而延缓慢性肾脏病的发生。研究显示，IMD 能激 AMPK 26S I 活腺苷酸活化蛋白激酶 （ ）抑制 蛋白酶体减少 型三磷酸鸟苷环化水解 GTPCH-I GTPCH-I eNOS 酶 （ ）降解，而 高表达可以减少内皮一氧化氮合酶 （ ）解 ROS IMD eNOS 偶联，减少活性氧族 （ ）产生。因此，我们推测 可能通过抑制 解偶 联保护内皮细胞。本实验探究AMPK/26S蛋白酶体-GTPCH-I 信号通路是否参与了 IMD 抑制eNOS解偶联的过程，从而阐明IMD 通过抑制eNOS解偶联减少ROS产 生保护内皮细胞的分子机制。 方法： 1.建立细胞缺氧复氧模型。将人脐静脉内皮细胞 （HUVECs ）在含有 92%N +5%CO +3%O 18 2 2 2 的三气培养箱缺氧培养 小时后，放入正常培养箱复氧培养 6 2. HUVECs IMD 小时。 将状态良好的 随机分为正常对照组、缺氧复氧模型组、 干 IMD+compound C AMPK 预组、 （ 抑制剂）干预组。干预组细胞均在加入药物的培 1 3. Westernblot eNOS 养基中预处理 小时后进行缺氧复氧培养。通过 法测定 二聚体 / IMD eNOS 4. Westernblot GTPCH-1 单体表达，观察 对 解偶联的影响。 通过 法测定 IMD GTPCH-I 5. Elisa 26S 的表达，观察 对 表达的影响。通过 法测定 蛋白酶体活性， IMD 26S 6. Western blot